[发明专利]一种检测生殖支原体的引物和探针、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及医学检测技术领域，具体涉及一种检测生殖支原体的引物和探针、试剂盒及检测方法。该引物和探针包括：SEQ ID NO:1～2所示核苷酸序列的引物对和SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针。本发明提供的引物和探针能够特异性与生殖支原体外膜蛋白B基因、人β珠蛋白基因相结合，显著提高了检测的灵敏度和特异性，对低值样本的检出率达100％，检测结果准确可靠，可应用于临床生殖支原体的检测。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，具体涉及一种检测生殖支原体的引物和探针、试剂盒及检测方法。

背景技术

生殖支原体(Mycoplasma genitalium，MG)属于支原体科柔膜菌纲，是导致非淋菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis，NGU)的病原体之一。此外，MG与盆腔炎性疾病(pelvic inflammatory disease，PID)、产科并发症、前列腺炎、附睾炎以及包皮龟头炎等性传播疾病密切相关。近年来，研究发现，MG感染还可能与肿瘤及人类免疫缺陷病毒(HIV)的发生发展有关。

2016欧洲生殖支原体感染指南指出，生殖支原体在男性非衣原体性非淋球菌性尿道炎(NCNGU)中的流行率为10％-35％。在国内，生殖支原体在性病门诊感染率为4.0-19.4％。在女性生殖支原体感染中，30.4％同时合并感染淋病，25.0％合并感染衣原体。此外，HIV感染中有2-33％人合并感染生殖支原体。近年来由于MG感染的流行以及检测技术的不断进步，MG已经成为了性传播疾病中的重要病原体之一。

MG的检测方法包括：分离培养法、血清学方法及分子生物学方法。分离培养是诊断生殖支原体感染的“金标准”，但是MG培养成功率极低且周期较长。血清学检测方法因MG与肺炎支原体(Mycoplasma Pneumonia，Mp)的抗原存在交叉反应而缺乏特异性在实际应用上受到一定限制。近年来，核酸检测技术以其灵敏度高，特异性强，检测范围宽，易于实现自动化等优势在疾病检测方面应用越来越越广泛。目前，国内基于PCR技术检测MG的试剂盒较少，且自动化程度不高，检测时间较长，假阴性较高，因此，开发一种灵敏度高，检测时间短，假阳性低，简便快捷的试剂盒是亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测生殖支原体的引物和探针、试剂盒及检测方法，该试剂盒检测生殖支原体的灵敏度高、特异性好、检测时间短。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供一种用于检测生殖支原体的引物和探针，包括：

SEQ ID NO:1～2所示核苷酸序列的引物对和SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针。

本发明通过比对GeenBank数据库收录全部生殖支原体基因组序列，针对生殖支原体外膜蛋白B基因设计了SEQ ID NO:1～2所示核苷酸序列的引物和SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针，其中：

SEQ ID NO:1：5’-AGCCTTACCACACCTTCGTAG-3’

SEQ ID NO:2：5’-TGGCATTCTTTGTTTGCATTGGAG-3’；

SEQ ID NO:3：5’-AGGGATCACCCATGCAGGGAGT-3’。

一些实施方案中，SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团FAM，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1。

本发明还提供了检测生殖支原体的试剂盒，包括本发明所述的引物和探针。

本发明提供的试剂盒还包括用于检测内参基因的SEQ ID NO:4～5所示核苷酸序列的引物和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针。