[发明专利]一种提高环糊精葡萄糖基转移酶分泌表达的优化方法及其应用有效
| 申请号： | 201911341391.2 | 申请日： | 2019-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN113025590B | 公开（公告）日： | 2022-08-09 |
| 发明（设计）人： | 李梦娇;石艳丽;温朝;王冠凤;郭学平 | 申请（专利权）人： | 华熙生物科技股份有限公司;山东华熙海御生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12P19/18;C12P19/44 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 贾波 |
| 地址： | 250101 山东省济*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 环糊精 葡萄 糖基转移酶 分泌 表达 优化 方法 及其 应用 | ||
1.一种提高环糊精葡萄糖基转移酶分泌表达的优化方法，其特征是：环糊精葡萄糖基转移酶在大肠杆菌中进行异源表达的发酵过程中，向发酵培养基中添加甘氨酸、Ca2+、β-环糊精、牛磺酸和乳糖；β-环糊精和牛磺酸在发酵开始时加入，甘氨酸、Ca2+和乳糖在发酵至OD600为0.4-0.6时加入。
2.根据权利要求1所述的优化方法，其特征是：所述大肠杆菌为含编码环糊精葡萄糖基转移酶基因的重组大肠杆菌。
3.根据权利要求1或2所述的优化方法，其特征是：甘氨酸在发酵体系中的浓度为100mmol/L-300 mmol/L。
4.根据权利要求3所述的优化方法，其特征是：甘氨酸在发酵体系中的浓度为200mmol/L。
5.根据权利要求1或2所述的优化方法，其特征是：Ca2+在发酵体系中的浓度为5 mmol/L-15 mmol/L。
6.根据权利要求5所述的优化方法，其特征是：Ca2+在发酵体系中的浓度为10 mmol/L。
7.根据权利要求1或2所述的优化方法，其特征是：β-环糊精在发酵体系中的浓度为5mmol/L -20 mmol/L。
8.根据根据权利要求7所述的优化方法，其特征是：β-环糊精在发酵体系中的浓度为5mmol/L -10 mmol/L。
9.根据权利要求8所述的优化方法，其特征是：β-环糊精在发酵体系中的浓度为10mmol/L。
10.根据权利要求1或2所述的优化方法，其特征是：牛磺酸在发酵体系中的浓度为0. 8mmol/L -1.1 mmol/L。
11.根据权利要求10所述的优化方法，其特征是：牛磺酸在发酵体系中的浓度为1mmol/L。
12.根据权利要求1或2所述的优化方法，其特征是：乳糖在发酵体系中的浓度为5mmol/L -30 mmol/L。
13.根据权利要求12所述的优化方法，其特征是：乳糖在发酵体系中的浓度为15 mmol/L。
14.根据权利要求1或2所述的优化方法，其特征是：所述发酵培养基为TB培养基，成分包括：胰蛋白胨10-15g/L、酵母粉20-25 g/L、甘油3-6 g/L、KH2PO4 2-5 g/L、K2HPO4.3H2O15-20 g/L。
15.根据权利要求1或2所述的优化方法，其特征是：发酵培养的温度为22-28℃，搅拌速度为180-220 rpm。
16.一种生产维生素C葡萄糖苷的方法，其特征是：包括制备环糊精葡萄糖基转移酶的步骤，所述环糊精葡萄糖基转移酶采用权利要求1-14中任一项所述的提高环糊精葡萄糖基转移酶分泌表达的优化方法制得。
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