[发明专利]菌种ZFM54的获取方法

说明书

本发明公开一种菌种ZFM54的获取方法，其包括：(A)从婴儿粪便中分离乳酸菌；(B)菌种的活化和保藏；(C)指示菌的培养；(D)乳酸菌初筛；(E)产细菌素乳酸菌复筛；以及(F)菌种鉴定，菌种ZFM54能够作为天然食品防腐剂和抗生素替代品。

技术领域

本发明涉及菌种培养、筛选领域，更进一步，涉及一菌种ZFM54的获取方法。

背景技术

微生物和食源性致病菌的污染是导致食品腐败和食物中毒的主要原因，目前食品工业中最常用的预防和控制微生物污染的方法就是向其中添加化学防腐剂。但是化学防腐剂如果使用不当会有一定的副作用，对人体健康造成危害。加之新世纪以来，由于抗生素的滥用，动物源食品中的药物残留成为人类健康的一大严重威胁，引起人体过敏反应和体内菌群失衡，从而导致腹泻、维生素缺乏等。而且随之产生的细菌抗生素耐药性问题也对公众健康和畜牧生产有着非常重要的影响。因此，寻找安全、绿色、无毒的化学防腐剂替代品，解决抗生素耐药性问题成为世界趋势。益生菌(Probiotics)又称微生态调节剂、生态制品、活菌制剂等，是指一类通过添加到食品或饲料中能够起到调节肠道微生态，从而对人或动物产生有利影响的微生物。益生菌的概念最早源于希腊语，意为“对生命有益”。 2001年，联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)联合专家组对益生菌做出如下定义：通过摄取适当的量、对食用者的身体健康能发挥有效作用的活菌。益生菌在自然界、人和动物体内的存在十分广泛，主要包括双歧杆菌类、乳杆菌类、革兰氏阳性球菌类和真菌类。目前，对主要来源于动物体内的一些双歧杆菌、乳酸杆菌、嗜酸乳杆菌、非致病性的链球菌、肠球菌、放线菌和酵母菌等的研究较为广泛。益生菌具有调节肠道菌群结构，改善肠道健康，促进营养元素的消化吸收，抑制致病微生物的生长和调节免疫应答的作用。随着人们对其益生功能认识的深入，对益生菌的研究和应用愈发受到重视，人们对食品加工的需求也越来越向绿色和天然等理念转变。在这种情况下，益生菌代替化学防腐剂达到食品防腐保鲜，代替抗生素作为饲料添加剂喂食畜禽^[7-9]以改善其生长性能以及作为疾病治疗的新型手段逐步进入人们的视野。而乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB) 作为微生物学中公认的益生菌，被公认为是安全的(generally recognized as safe， GRAS)食品级微生物，对人畜健康绝对安全。正是由于乳酸菌及其代谢产物的安全和益生特性，使其应用于食品以及饲料中具有很好的可行性，控制不良细菌的生长能以食品级和更自然的方式发生。

乳酸菌是一类能发酵碳水化合物产生乳酸的无芽孢、革兰氏阳性细菌的总称。乳酸菌一般性描述为球菌或者杆菌，兼性厌氧。19世纪中叶，法国科学家巴斯德在研究酒变酸的原因时首先发现了乳酸菌。随后J.Lister在1873年分离得到第一个纯培养的乳酸菌。乳酸菌广泛存在于奶类、肉类食品、发酵蔬菜以及水果中，人和动物肠道、口腔等部位也是乳酸菌生长旺盛的地方。乳酸菌除了具有改善人体肠道功能、增强机体免疫力、防止腹泻、降低胆固醇等益生功能外，还可以改善食品的质地风味，提高食品的营养价值，其代谢产生的有机酸、过氧化氢以及细菌素等天然物质还能抑制食品中致病菌的生长，防止食品腐败。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一菌种ZFM54的获取方法，其中所述菌种 ZMF54是一种副干酪乳杆菌，其能够作为天然食品防腐剂和抗生素替代品。

本发明的一个目的在于提供一菌种ZMF54的获取方法，其从初生婴儿粪便中分离乳酸菌，通过初筛得到一株具有广谱抗菌作用的乳酸菌优势菌株，经过排除有机酸、过氧化氢和酶水解的复筛试验确定该菌株产生的抑菌物质中含有细菌素这样的蛋白质或多肽，利用生理生化鉴定和16S rDNA序列分析对该菌株进行种属鉴定。

本发明的一个目的在于提供一菌种ZMF54的获取方法，其中所述菌种 ZFM54对藤黄微球菌10209、单增李斯特氏菌LM1等革兰氏阳性菌和大肠杆菌 DH5、鼠伤寒沙门氏菌CMCC 50015等革兰氏阴性菌均有抑菌效果且抑菌活性较强。