[发明专利]一种检测鸡OASL启动子活性方法

权利要求书

1.一种检测鸡OASL启动子活性方法，其特征是：设计扩增鸡OASL启动子部分片段的引物与pGL3-basic连接,构建荧光素酶报告质粒pGL3-basic-OASL,并用双荧光素酶报告基因试剂盒验证其功能；包括以下步骤：

1）利用下述扩增鸡OASL启动子部分片段的引物，以CEF的基因组为模板，PCR扩增出鸡OASL启动子部分基因；

上游引物：5‘ CCGCTCGAGcttgatggcatgagtcctcctgcc 3’；

下游引物：5‘GGGAAGCTTgctccgccgccgctcgctgcag 3’；

2）用XhoI和HindⅢ限制性内切酶对上述鸡OASL启动子部分基因和荧光素酶报告载体pGL3-basic分别进行双酶切，得到酶切产物；

3）酶切产物纯化后经T4连接酶连接后转化并鉴定，获得pGL3-basic-OASL报告基因质粒；

4）用双荧光素酶报告基因试剂盒验证重组质粒pGL3-basic-OASL的功能。

2.根据权利要求1所述的一种检测鸡OASL启动子活性方法，其特征是：步骤1）中，所述扩增鸡OASL启动子部分片段的引物：上游引物位于OASL起始密码子上游-968~-945位，且在5’端带有XhoI内切酶序列；下游引物位于OASL起始密码子上游-1~-22位，且在5’端带有HindⅢ内切酶序列。

3.根据权利要求1所述的一种检测鸡OASL启动子活性方法，其特征是：步骤3）中，酶切产物纯化后经T4连接酶连，转化大肠杆菌，经酶切和测序验证后，获得pGL3-basic-OASL报告基因质粒。