[发明专利]一种杂交瘤细胞冻存液及96孔板冻存复苏方法

权利要求书

1.一种杂交瘤细胞冻存液，其特征在于，其组分按体积百分比包括：

二甲基亚砜 8％～12％

胎牛血清 50％～60％

含添加剂的基础培养基IMDM 30％～40％。

2.如权利要求1所述的杂交瘤细胞冻存液，其特征在于，所述添加剂的组分包括：硫酸锌、对氨基苯甲酸、硫辛酸、亚油酸、腐胺、乙醇胺和谷胱甘肽。

3.如权利要求2所述的杂交瘤细胞冻存液，其特征在于，所述硫酸锌的质量浓度为0.0114mg/L、所述对氨基苯甲酸的质量浓度为1mg/L、所述硫辛酸的质量浓度为0.2mg/L、所述亚油酸的质量浓度为0.084mg/L，所述腐胺的质量浓度为0.161mg/L，所述乙醇胺的质量浓度为0.16mg/L，所述谷胱甘肽的质量浓度为1mg/L。

4.如权利要求1所述的杂交瘤细胞冻存液，其特征在于，所述杂交瘤细胞冻存液配制完成后，于-20℃保存。

5.一种杂交瘤细胞的96孔板冻存复苏方法，其特征在于，包括以下步骤：S10、取待冻存的孔内有杂交瘤细胞悬液的96孔板，吸掉所述96孔板中待冻存孔内的杂交瘤细胞悬液的上清液；

S20、将如权利要求1～4任意一项所述的杂交瘤细胞冻存液和完全培养基加入按1:1的体积比加入到所述待冻存孔内，轻拍96孔板，使所述冻存液和完全培养基与所述杂交瘤细胞混合均匀，然后转入-80℃冰箱冷冻保存；

S30、将冻存杂交瘤细胞的96孔板从-80℃冰箱取出，于培养箱中解冻30～40min，从培养箱中取出所述冻存杂交瘤细胞的96孔板，吸弃冻存孔内上清液，加入所述完全培养基，于培养箱中培养，得到复苏细胞。

6.如权利要求5所述的杂交瘤细胞的96孔板冻存复苏方法，其特征在于，步骤S10中，所述杂交瘤细胞悬液中的细胞浓度为2×10⁴～5×10⁴个/ml。

7.如权利要求5所述的杂交瘤细胞的96孔板冻存复苏方法，其特征在于，所述完全培养基包括胎牛血清、谷氨酰胺、青链双抗、HT和IMDM基础培养基。

8.如权利要求5所述的杂交瘤细胞的96孔板冻存复苏方法，其特征在于，步骤S30中，所述培养箱培养条件均为：37℃、5％CO₂。