[发明专利]一种杂交瘤细胞冻存液及96孔板冻存复苏方法

说明书

本发明公开一种杂交瘤细胞冻存液及96孔板冻存复苏方法，涉及细胞生物学技术领域。所述杂交瘤细胞冻存液其组分按体积百分比包括：8％～12％二甲基亚砜、50％～60％胎牛血清和30％～40％含添加剂的基础培养基IMDM。本发明的杂交瘤细胞冻存液，可以在杂交瘤细胞筛选过程中，在96孔板内，每个孔的细胞数量较少时即对其进行冻存，并且可以进行批量冻存复苏，操作简单；同时保持了细胞高复苏活率，不影响细胞的特性，有助于细胞冻存技术的快速应用和推广。

技术领域

本发明涉及细胞生物学技术领域，特别涉及一种一种杂交瘤细胞冻存液 及96孔板冻存复苏方法。

背景技术

细胞冻存：是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一 种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，起到了细胞保种的作用。

细胞复苏：是指将冻存在液氮或者-80℃冰箱中的细胞37℃解冻之后重新 培养，细胞恢复生长的过程。

现有冻存液基本配方基本为10％二甲基亚砜(DMSO)+90％胎牛血清， 冻存方法都是程序降温，即4℃，2h；然后转到-20℃，2h；-80℃，2h；最后 放入液氮罐。冻存过程比较繁琐和费时。细胞冻存与复苏后，细胞存活率不 高；并且需要冻存前至少5*10⁶细胞数目才能保证复苏出来成活率。而杂交瘤 细胞一般都是在96孔板中筛选出来，细胞数目比较少，要单个孔的细胞冻存， 需要从96孔—48孔—24孔—6孔—10cm培养皿，不断扩大培养至可以冻存 的细胞数目，耗时比较长。而不同操作之间的批间差异较大；现有冻存液及 方法不适合96孔板杂交瘤细胞的冻存与复苏，对于批量细胞的短期冻存与复 苏，其操作繁琐。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种一种杂交瘤细胞冻存液及96孔板冻存复苏 方法，旨在现有冻存液不适合杂交瘤细胞筛选过程中的冻存复苏的问题。

为实现上述目的，本发明提出一种杂交瘤细胞冻存液，所述杂交瘤细胞 冻存液其组分按体积百分比包括：

二甲基亚砜 8％～12％

胎牛血清 50％～60％

含添加剂的基础培养基IMDM 30％～40％。

优选地，所述添加剂的组分包括：硫酸锌、对氨基苯甲酸、硫辛酸、亚 油酸、腐胺、乙醇胺和谷胱甘肽。

优选地，所述硫酸锌的质量浓度为0.0114mg/L、所述对氨基苯甲酸的质 量浓度为1mg/L、所述硫辛酸的质量浓度为0.2mg/L、所述亚油酸的质量浓度 为0.084mg/L，所述腐胺的质量浓度为0.161mg/L，所述乙醇胺的质量浓度为 0.16mg/L，所述谷胱甘肽的质量浓度为1mg/L。

优选地，所述杂交瘤细胞冻存液配制完成后，于-20℃保存。

此外，本发明还提出一种杂交瘤细胞的96孔板冻存复苏方法，包括以下 步骤：S10、取待冻存的孔内有杂交瘤细胞悬液的96孔板，吸掉所述96孔板 中待冻存孔内的杂交瘤细胞悬液的上清液；

S20、将如权利要求1～4任意一项所述的杂交瘤细胞冻存液和完全培养基 加入按1:1的体积比加入到所述待冻存孔内，轻拍96孔板，使所述冻存液和 完全培养基与所述杂交瘤细胞混合均匀，然后转入-80℃冰箱冷冻保存。

S30、将冻存杂交瘤细胞的96孔板从-80℃冰箱取出，于培养箱中解冻 30～40min，从培养箱中取出所述冻存杂交瘤细胞的96孔板，吸弃冻存孔内上 清液，加入所述完全培养基，于培养箱中培养，得到复苏细胞。

优选地，步骤S10中，所述杂交瘤细胞悬液中的细胞浓度为2×10⁴～5×10⁴个/ml。