[发明专利]检测三种无花果病毒的引物组合、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了同时检测三种无花果病毒的引物组合、试剂盒及其应用。本发明首先公开了本发明检测或辅助检测三种无花果病毒中至少一种病毒的引物组合，包括用于检测或辅助检测无花果斑点相关病毒的引物对1、用于检测或辅助检测无花果叶斑相关病毒的引物对2和用于检测或辅助检测无花果花叶病毒的引物对3。本发明进一步公开了检测或辅助检测待测样品中是否含有三种无花果病毒的方法。本发明首次建立了检测FFkaV、FLMaV和FMV的多重RT‑PCR方法，突破了同时检测侵染无花果的FFkaV、FLMaV和FMV三种病毒的技术瓶颈，可以用于无花果病毒病害的监测预警。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及检测三种无花果病毒的引物组合、试剂盒及其应用。

背景技术

无花果(Ficus carica)是桑科(Moraceae)榕属(Ficus)的一种多年生亚热带落叶果树，是人类最早驯化的古老果树之一。作为一种特殊的果品和天然植物药物，无花果有广泛的营养和药用价值。其果实柔软味甜、营养丰富、性味甘平，是中国的重要经济果树之一，分布于全国各地如新疆、山东、福建、江苏、四川、上海、江西、河南和广东等地。在无花果栽培中，病毒病成为制约产业发展的重要因子之一。近年来，无花果病毒病在新疆普遍发生，每年造成严重的产量损失。

目前，已报道的无花果病毒至少有15种，田间栽培中正常看到叶斑、畸形、果斑等症状。此前，调查及鉴定了新疆、北京和江苏等地的无花果产区的病毒发生情况和病毒种类，发现在中国普遍存在的无花果病毒主要有3种，并且具有复合侵染的现象，不但影响果实品质，也会影响果实外观。这三种病毒分别是布尼亚病毒科(Bunyaviridae)欧洲花楸环斑病毒属(Emaravirus)的无花果花叶病毒(fig mosaic virus,FMV)、芜菁黄花叶病毒科(Tymoviridae)芜菁黄花叶病毒属(Tymovirus)的无花果斑点相关病毒(fig fleck-associated virus,FFkaV)以及长线形病毒科(Closteroviridae)葡萄卷叶病毒属(Ampelovirus)的无花果叶斑相关病毒(fig leaf mottle-associated virus,FLMaV)。

建立经济、快速、准确、灵敏的检测方法可以有效控制无花果病毒的扩散及蔓延，为降低其危害提供支撑。目前，尚未研制出上述3种病毒的抗体，血清学检测技术不适用于它们。因此，通常使用RT-PCR检测这3种病毒。但是，单重的RT-PCR操作繁琐其成本较高。为此，建立一种能够同时检测FFkaV、FMV和FLMaV的多重RT-PCR检测方法在田间预防和防止病害的蔓延具有极为重要的作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何建立能够准确、高效、灵敏且检测无花果斑点相关病毒(fig fleck-associated virus,FFkaV)、无花果叶斑相关病毒(fig leafmottle-associated virus,FLMaV)和无花果花叶病毒(fig mosaic virus,FMV)的多重RT-PCR检测方法，以降低检测成本、提高检测的效率，达到节时节费的目的。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了检测或辅助检测三种无花果病毒的引物组合。

本发明检测或辅助检测三种无花果病毒中至少一种(如三种、某两种或某一种)的引物组合，包括用于检测或辅助检测无花果斑点相关病毒的引物对1、用于检测或辅助检测无花果叶斑相关病毒的引物对2和用于检测或辅助检测无花果花叶病毒的引物对3；

所述引物对1由引物FFkaV-F和引物FFkaV-R组成：

所述引物FFkaV-F为SEQ ID NO.1所示的单链DNA分子；所述引物FFkaV-R为SEQ IDNO.2所示的单链DNA分子；

所述引物对2由引物FLMaV-F和引物FLMaV-R组成：