[发明专利]一种用于分离外周血单个核细胞的分离方法在审
| 申请号： | 201911346236.X | 申请日： | 2019-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN111117957A | 公开（公告）日： | 2020-05-08 |
| 发明（设计）人： | 周成林;刘勇;王春香;彭海林 | 申请（专利权）人： | 泰州市人民医院;江苏康为世纪生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 南京常青藤知识产权代理有限公司 32286 | 代理人： | 仲晖 |
| 地址： | 225300 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 分离 外周血 单个 细胞 方法 | ||
1.一种用于分离外周血单个核细胞的分离方法，其特征在于：S1、分离管制备：先将密度为1.075至1.0796g/ml的Percoll或聚蔗糖或泛影葡胺细胞分离液2至6ml加入离心管，吸取密度为1.06至1.07g/ml的分离胶0.5至1.5ml加到离心管的管口，800至1200g离心力下室温水平离心1至3分钟，使分离胶在Percoll或聚蔗糖或泛影葡胺细胞分离液的液面形成隔离层即完成分离管制备；
S2、外周血单个核细胞的分离：将抗凝全血2至6ml加入到制备好的分离管中，800至1200g离心力下室温水平离心8至12分钟；吸弃最上面液体以去除细胞碎片和血小板，直接将隔离层以上液体倾倒至收集管中，600至1000g离心力下室温离心4至6分钟，用PBS重悬细胞后即可获得外周血单个核细胞。
2.根据权利要求1所述的一种用于分离外周血单个核细胞的分离方法，其特征在于：S1步骤中，将密度为1.075至1.0796g/ml的Percoll或聚蔗糖或泛影葡胺细胞分离液4ml加入容积为15ml的离心管内，吸取密度为1.06至1.07g/ml的分离胶1ml加到离心管的管内，1000g离心力下室温水平离心2分钟。
3.根据权利要求1所述的一种用于分离外周血单个核细胞的分离方法，其特征在于：S1步骤中，分离胶与Percoll或聚蔗糖或泛影葡胺细胞分离液的体积比为1:4至1:3，分离胶和细胞分离液总体积与分离管的体积比为1:2至1:1.5。
4.根据权利要求1所述的一种用于分离外周血单个核细胞的分离方法，其特征在于：S2步骤中，将抗凝全血4ml加入到制备好的分离管中，抗凝全血与Percoll或聚蔗糖或泛影葡胺细胞分离液的体积比为1:1；1000g离心力下室温水平离心10分钟；吸弃最上面液体以去除细胞碎片和血小板，并将隔离层以上液体倾倒至收集管中，800g离心力下室温离心5分钟，用PBS重悬细胞后即可获得外周血单个核细胞。
5.根据权利要求1所述的一种用于分离外周血单个核细胞的分离方法，其特征在于：S2步骤中，吸弃最上面液体以去除细胞碎片和血小板，吸弃液体积与抗凝全血的体积比为1:3。
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