[发明专利]一种用于分离外周血单个核细胞的分离方法

说明书

本发明提供一种用于分离外周血单个核细胞的分离方法，具体涉及生物医药领域，S1、分离管制备：先将密度为1.075至1.0796g/ml的Percoll或聚蔗糖或泛影葡胺细胞分离液2至6ml加入离心管，吸取密度为1.06至1.07g/ml的分离胶0.5至1.5ml加到离心管的管口，800至1200g离心力下室温水平离心1至3分钟，使分离胶在Percoll或聚蔗糖或泛影葡胺细胞分离液的液面形成隔离层即完成分离管制备；S2、外周血单个核细胞的分离：将抗凝全血2至6ml加入到制备好的分离管中，800至1200g离心力下室温水平离心8至12分钟；吸弃最上面液体以去除细胞碎片和血小板，直接将隔离层以上液体倾倒至收集管中，600至1000g离心力下室温离心4至6分钟，用PBS重悬细胞后即可获得外周血单个核细胞。本发明可确保加入抗凝全血后绝对不与细胞分离介质混和，保证收获外周血单个核细胞时不污染其它细胞。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种用于分离外周血单个核细胞的分离方法。

背景技术

外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，外周血单个核细胞)是指外周血中具有单个核的细胞，主要包含淋巴细胞(T细胞、B细胞和NK细胞)、单核细胞、吞噬细胞和其他少量细胞类型。外周血单个核细胞是参与机体免疫应答功能的重要细胞，其细胞亚群的频率存在个体差异。70％-90％为淋巴细胞，单核细胞占10％-30％，仅1％-2％为树突状细胞。在淋巴细胞亚群中，70％-85％为CD3+T细胞，5％-20％是B细胞，NK细胞占5％-20％。外周血单个核细胞是感染性疾病、血液系统疾病，抗体药物和疫苗研发、肿瘤免疫治疗以及移植免疫等领域经常需要的研究材料，也可应用于单个亚群细胞特性或者亚群之间相互关系的研究。

目前分离外周血单个核细胞的经典方法是基于细胞分离介质Ficoll的密度梯度离心法。由于红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底。外周血单个核细胞比重小于或等于Ficoll比重，离心后位于Ficoll液面上。吸取Ficoll液面的细胞即可收获外周血单个核细胞。该方法具有两个明显缺点：1、操作繁琐：需逐层仔细加入Ficoll和抗凝全血以形成界限分明的分离介质层与血液层，离心前分离介质层与血液层的混合将导致分离失败；2、分离结束后需用吸管吸取外周血单个核细胞，此过程很容易受到其它细胞的污染。

鉴于现有技术的不足，现需要一种用于分离外周血单个核细胞的分离方法，不仅方便、高效，且可完全避免收获外周血单个核细胞细胞时受到其它细胞的污染。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于分离外周血单个核细胞的分离方法，不仅方便、高效，且可完全避免收获外周血单个核细胞细胞时受到其它细胞的污染。

本发明提供了如下的技术方案：

一种用于分离外周血单个核细胞的分离方法，

S1、分离管制备：先将密度为1.075至1.0796g/ml的Percoll或聚蔗糖或泛影葡胺细胞分离液2至6ml加入离心管，吸取密度为1.06至1.07g/ml的分离胶0.5至1.5ml加到离心管的管口，800至1200g离心力下室温水平离心1至3分钟，使分离胶在Percoll或聚蔗糖或泛影葡胺细胞分离液的液面形成隔离层即完成分离管制备；

S2、外周血单个核细胞的分离：将抗凝全血2至6ml加入到制备好的分离管中，800至1200g离心力下室温水平离心8至12分钟；吸弃最上面液体以去除细胞碎片和血小板，直接将隔离层以上液体倾倒至收集管中，600至1000g离心力下室温离心4至6分钟，用PBS重悬细胞后即可获得外周血单个核细胞。

优选的，S1步骤中，将密度为1.075至1.0796g/ml的Percoll或聚蔗糖或泛影葡胺细胞分离液4ml加入容积为15ml的离心管内，吸取密度为1.06至1.07g/ml的分离胶1ml加到离心管的管内，1000g离心力下室温水平离心2分钟。