[发明专利]依诺肝素钠中硫酸根与羧酸根摩尔比的检测分析方法

说明书

本发明公开了依诺肝素钠中硫酸根与羧酸根摩尔比的检测分析方法，S1、用蠕动泵将去二氧化碳水冲洗阴、阳离子交换柱，S2、收集供试品溶液，S3、记录最初的电导率值，S4、向电导池中加入氢氧化钠溶液，记录加入体积和电导率值，S5、计算硫酸根与羧酸根的摩尔比，本发明涉及分析化学技术领域。该依诺肝素钠中硫酸根与羧酸根摩尔比的检测分析方法，对美国药典USP38‑NF 33中依诺肝素钠硫酸根与羧酸根摩尔比方法进行优化，该药典方法需要使用高效离子色谱仪将供试品溶液注入离子柱，通过离子检测器判定分离出来的溶液收集节点，优化后的方法只需要蠕动泵、电导率仪等常规设备，即可完成溶液的收集，该方法检测成本低、操作方便。

技术领域

本发明涉及天然药物化学以及其质量控制技术领域，具体为依诺肝素钠中硫酸根与羧酸根摩尔比的检测分析方法。

背景技术

依诺肝素钠是肝素解聚体的钠盐，它是通过肝素苯甲酯在碱性条件下解聚制成的。依诺肝素钠是在临床上主要是用于预防和治疗深静脉血栓或肺栓塞的抗凝血剂的低分子量肝素。依诺肝素钠的双糖结构含硫酸根和羧酸根，其摩尔比值反映了双糖单位的结构特征，硫酸根的数目和位置与其活性密切相关。

美国药典USP38-NF 33中收载了依诺肝素钠硫酸根与羧酸根摩尔比值的方法：将供试品溶液注入高效离子色谱仪，通过阴离子交换柱和阳离子交换柱分离，在阳离子交换柱出口收集洗脱液至烧杯中，直至离子检测器的读数回到基线值，将洗脱液用0.1N氢氧化钠溶液进行电导滴定，根据氢氧化钠的消耗量与电导率变化，计算出硫酸根与羧酸根的摩尔比值，该方法需借助高效离子色谱仪收集供试品洗脱液，实验过程较为复杂。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了依诺肝素钠中硫酸根与羧酸根摩尔比的检测分析方法，解决了实验过程较为复杂的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：依诺肝素钠中硫酸根与羧酸根摩尔比的检测分析方法，采用阴离子交换树脂、阳离子交换树脂进行洗脱，并用0.1N的氢氧化钠溶液对洗脱液进行电导滴定，具体包括以下步骤：

S1、用蠕动泵将去二氧化碳水冲洗阴、阳离子交换柱，阳离子交换柱出口端收集洗出液，先冲洗200ml洗出液后弃去，另收集10ml洗出液进行电导率测定，重复上述操作，直至电导值的读数稳定；

S2、用蠕动泵将20ml浓度为5mg/ml的供试品溶液由阴离子交换柱进样端进样，再用去二氧化碳水冲洗阴、阳离子交换柱，并且用三角瓶在阳离子交换柱出口端收集洗出液，收集60ml的洗出液作为供试品溶液，另收集洗出液10ml进行电导率测定，重复上述操作，直至电导率值读数稳定；

S3、将收集液转移至带有磁力搅拌棒的三角瓶中，将三角瓶放在磁力搅拌器上，并浸入电极，记录最初的电导率值；

S4、每次向电导池中加入100μl 0.1N的氢氧化钠溶液，每加入一次氢氧化钠溶液，记录加入体积和电导率值，当记录的电导率值大于供试品溶液最初的电导率值时，停止继续增加氢氧化钠溶液；

S5、以电导值为y轴，氢氧化钠的体积数为x轴，绘制曲线，曲线中有三条近似线性的部分：最初是下滑线，中间轻度上升线，最后上升线，对每一段进行最佳线性回归分析，第一条和第二条线的相交处得出加入样品硫酸根消耗氢氧化钠的体积V_S，第二条和第三条线的相交处得出加入样品硫酸根和羧酸根消耗氢氧化钠的体积V_T，然后根据公式Result＝V_S/(V_T-V_S)计算硫酸根与羧酸根的摩尔比。

优选的，所述阴离子交换树脂以L64为填充剂，所述阳离子交换树脂以 L65为填充剂。

优选的，所述步骤S1中电导率值读数稳定指每次测得的电导率数值相差不超过3μS/cm。