[发明专利]一种柱前衍生化法测定AE-活性酯纯度的方法

说明书

本发明公开了一种柱前衍生化法测定AE‑活性酯纯度的方法，属于药物分析技术领域。包括以下步骤：(1)取AE‑活性酯，加入硼氢化钠溶液中摇匀；(2)取步骤(1)制备的溶液1ml置于100ml容量瓶中，在30℃水浴中保持1小时后取出放至室温，用溶剂稀释至刻度，作为供试品溶液；(3)色谱条件为：C18 150mm×4.6mm×5.0μm，检测波长为254nm，流速为1ml·min^‑1，流动相为水‑乙腈；取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积归一化法计算纯度。本发明方法采用柱前衍生化法测定AE‑活性酯纯度，避免了直接测定时发生水解，衍生试剂为硼氢化钠的甲醇溶液，方法简单易行，准确度高。

技术领域

本发明涉及AE-活性酯纯度的测定方法，属于药物分析技术领域。

背景技术

AE-活性酯(MAEM)，化学名为2-甲氧亚氨基-2-(2-氨基-4-噻唑基)-(z)-硫代乙酸苯胼噻唑酯，其结构式如下：

AE-活性酯是许多半合成头孢菌素类抗生素的主要原料，比如是头孢噻肟钠、头孢曲松钠、头孢他美、头孢匹罗等第三、四代半合成头孢菌素类抗生素的一种重要的侧链。近年来，由于头孢类抗生素具有高效低毒、抗菌谱广的特点，得到广泛的应用。

AE-活性酯由于性质活泼，遇水易水解。目前针对AE-活性酯纯度的检测方法有化工行业标准HG/T 5150-2017、企业标准Q/0323YXH002-2018、文献“反相高效液相色谱法测定氨噻肟活性硫酯”(《色谱》2003年第1期95)以及文献“HPLC法测定注射用盐酸头孢吡肟中的AE-活性酯”(《临床医药文献电子杂志》2019年6月第8期1-2+4)中公开的检测方法，均为反相色谱法直接测定其纯度，结果偏低，无法准确反映AE-活性酯的质量。

AE-活性酯发生水解的反应原理如下：

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明要解决的技术问题在于提供一种准确度高的柱前衍生化法测定AE-活性酯纯度的方法。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案为：

柱前衍生化法测定AE-活性酯纯度的方法，包括以下步骤：(1)取AE-活性酯，加入硼氢化钠溶液中，振摇至完全溶解；(2)精密量取步骤(1)制备的溶液1ml置于100ml容量瓶中，在30℃水浴中保持1小时后取出放至室温，用溶剂稀释至刻度，作为供试品溶液；(3)色谱条件为：C18 150mm×4.6mm×5.0μm，检测波长为254nm，流速为1ml·min-1，流动相为水-乙腈(40∶60)(V/V)；精密量取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积归一化法计算纯度。

步骤(1)中硼氢化钠溶液制备方法为：将0.08～0.12g硼氢化钠溶于1000ml甲醇混合均匀得硼氢化钠溶液。

优选的将0.1g硼氢化钠溶于1000ml甲醇混合均匀得硼氢化钠溶液。

步骤(2)中的溶剂为乙腈与水的混合溶液，乙腈与水的体积比为1～9:1的混合溶液。

优选的乙腈与水的体积比为3:2。

步骤(3)中流动相水中磷酸二氢钾浓度为4.73g·L-1，磷酸氢二钾浓度为1.87g·L-1，磷酸调pH至5.0。

步骤(3)中流动相乙腈中含浓度为3.34g·L-1的四庚基溴化铵。

反应原理如下：