[发明专利]结合免疫球蛋白的单域抗体、抗禽流感单域抗体、双功能抗体及其应用

说明书

本发明公开了结合免疫球蛋白的单域抗体、抗禽流感单域抗体、双功能抗体及其应用。本发明从所构建的免疫纳米抗体基因库中筛选得到了能介导结合免疫球蛋白的单域抗体，其氨基酸序列分别SEQ ID NO.1‑4所示，该组单域抗体能特异性结合人IgA，而与人IgG和鼠IgG的结合亲和力非常低。本发明进一步提供了SEQ ID NO.5所示的抗禽流感单域抗体。本发明还将所述单域抗体与其它针对肿瘤、病毒病原体抗体或单域抗体进行融合构建得到多功能特异性融合蛋白，动物试验证明，所构建的融合蛋白具有延长功能抗体或单域抗体在动物体内半衰期时间，有效提高治疗性抗体的生物利用度，显著增强治疗性抗体生物靶向性治疗等效果。

技术领域

本发明涉及单域抗体，尤其涉及了一组介导结合免疫球蛋白的单域抗体、抗禽流感单域抗体 以及由单域抗体和抗禽流感单域抗体融合得到双功能抗体，本发明进一涉及它们在肿瘤、病原微 生物感染等疾病的治疗或检测中的应用，属于介导结合免疫球蛋白的单域抗体及其应用领域。

背景技术

比利时科学家Raymond Hamers等研究发现骆驼血液中除了有普通四条链抗体外，还有一种 自然存在的缺失轻链的重链抗体，该重链抗体基因在重组时，剪切掉了重链稳定区的CH1区的 基因，因而表达的重链缺少CH1区，不能与轻链连接形成普通的轻、重链四条链的抗体，形成 了仅有两条重链(无CH1)的重链抗体。将该重链抗体的可变区，称为VHH，以与普通抗体重 链可变区VH加以区别。经分子生物学方法，将VHH以噬菌体展示等技术制备VHH抗体基因 库，筛选得到的VHH，称为nanobody(纳米抗体)，或称为single domainantibody(sdAb，单 域抗体)，或称抗原结合域抗体片段。单域抗体具有结构简单，穿透力强，易于表达和纯化，亲 和力及稳定性高，无毒副反应等一系列优点，因而成为生物制药领域研究的热门课题，单域抗体 抗体技术也被认为是未来十年国际生物制药领域最先进、最有前途的十大生物制药技术之首的技 术。

单域抗体具有如上所述的优势，但也由于其分子小，在生物体内迅速被从血液循环中清除， 导致其在生物体内的消除半衰期短。单域抗体在生物体内的消除半衰期段是研发这一特定生物分 子医药要解决的难题之一。比利时Ablynx公司研发出抗人白蛋白(HSA)纳米抗体(见其专利： CN200780043274)用于其公司的纳米抗体候选药物研发，已研发出双特异性纳米抗体(2或3 体)药物，如将抗TNF、IL-6R等的纳米抗体分别与抗HSA的纳米抗体的基因克隆成为表达双 功能特异性纳米抗体融合蛋白，作为特异性靶向纳米抗体治疗候选药物研发技术手段，使单体纳 米抗体的动物体内半衰期由原来的15分钟提高到现在的2-3周，已取得了很好地效果，多个候 选药物已进入临床I，II期试验。

发明内容

本发明的目的之一是提供介导结合免疫球蛋白的单域抗体；

本发明的目的之二是提供一种抗流感单域抗体；

本发明的目的之三用所述的介导结合免疫球蛋白的单域抗体与抗流感单域抗体进行融合得 到双功能单域抗体融合蛋白；

本发明的目的之四是将所述的介导结合免疫球蛋白的单域抗体以及双功能抗体融合蛋白应 用于肿瘤、病原微生物感染等疾病的治疗或检测或增强治疗性抗体或多肽的作用效果、增加治疗 性抗体或多肽稳定性。

本发明首先提供了介导结合免疫球蛋白的单域抗体，所述的单域抗体选自单域抗体 sdAb-A8、单域抗体sdAb-D3、单域抗体sdAb-E12或单域抗体sdAb-G5中的任何一种。

其中，单域抗体sdAb-A8的氨基酸序列包括3个互补决定区和4个框架区；3个互补决定区 的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13所示；4个框架区的氨基 酸序列分别为SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28和SEQ ID NO.29所示；