[发明专利]一种嵌合抗原受体（CAR）及其应用

权利要求书

1.一种PD-L1单链抗体，其具有：氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的轻链可变区。

2.根据权利要求1所示的PD-L1单链抗体，其特征在于所示重链可变区和轻链可变区通过连接链连接，所述连接链的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

3.根据权利要求2所述的PD-L1单链抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

4.一种核酸分子，其编码权利要求1-3任一项所述的PD-L1单链抗体。

5.一种嵌合抗原受体，其包含权利要求1-3任一项所述的PD-L1单链抗体。

6.一种嵌合抗原受体，其包含：

(1)PD-L1抗原结合域；

(2)跨膜区：

(3)胞内信号传导域；

所述PD-L1抗原结合域包含权利要求1-3任一项所述的PD-L1单链抗体。

7.根据权利要求6所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜区选自下列膜蛋白的跨膜区：CD8α、FcεRI、TCRα、TCRβ和NKG2D。

8.根据权利要求6所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述胞内信号传导域还包括共刺激结构域和激活域，所述共刺激结构域选自下列蛋白的共刺激信号分子：CD137，CD28，OX40或ICOS中的一种或多种；所述激活域为来源于CD3 Zeta胞内信号传导序列。

9.根据权利要求6所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述PD-L1抗原结合域前还连接有引导肽序列，所述引导肽序列将目标蛋白定位于细胞膜，所述引导肽序列选自CD8α、CD8β、FcεRI、TCRα、TCRβ和NKG2D前导序列。

10.根据权利要求6所述的嵌合抗原受体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示。

11.一种核酸分子，其编码权利要求5-10任一项所述的嵌合抗原受体。

12.一种表达载体，其包括表达载体和接入所述表达载体的CAR基因序列，所述CAR基因序列为权利要求11所述的核酸分子，所述表达载体为慢病毒载体pGIPZ、pLenti-GFP、pLVX-shRNAz、pLJM1-EGFP中的任一种。

13.一种CAR-T细胞，其特征在于，所述细胞以权利要求12的表达载体修饰，以表达权利要求5-10任一项所述的嵌合抗原受体。

14.权利要求1-3任一项所述的PD-L1单链抗体、权利要求4所述的核酸分子、权利要求5-10任一项所述的嵌合抗原受体融合蛋白、权利要求11所述的核酸分子、权利要求12所述的表达载体、或权利要求13所述的CAR-T细胞在制备PD-L1高表达肿瘤治疗药物中的应用。

15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括肺癌、肝癌、结肠癌或淋巴瘤。

16.一种制剂，其含有权利要求13所述的CAR-T细胞，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。