[发明专利]耐甲醇脂肪酶

权利要求书

1.具有脂肪酶活性的多肽，其包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：

(a)如SEQ ID NO:4或6所示的氨基酸序列，以及

(b)由(a)所述的序列经过取代、缺失或添加至少一个氨基酸后得到的序列，

其中由(b)获得的多肽变体仍保持脂肪酶活性。

2.如权利要求1所述的多肽，其包含SEQ ID NO:4或6所示的氨基酸序列，优选地，所述多肽由SEQ ID NO:4或6所示的氨基酸序列组成。

3.编码权利要求1或2所述的多肽的多核苷酸，其包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：

(a)核苷酸序列，其编码如权利要求1(a)或1(b)所述的氨基酸序列；以及

(b)在严格条件下与(a)中的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。

4.如权利要求3所述的多核苷酸，其包含SEQ ID NO:3或5所示的核苷酸序列，优选地，所述多核苷酸由SEQ ID NO:3或5所示的核苷酸序列组成。

5.表达载体，其包含至少一种权利要求3或4所述的多核苷酸。

6.如权利要求5所述的表达载体，其还包含调节所述多核苷酸表达的调控序列，其中所述多核苷酸与所述调控序列可操作地连接，优选地，所述表达载体为质粒。

7.宿主细胞，其包含3或4所述的多核苷酸、或者权利要求5或6所述的表达载体，优选地，所述宿主细胞为酵母或大肠杆菌。

8.权利要求1或2所述的多肽用于进行脂肪酸甲酯化反应或用于制备生物柴油的用途，优选的，所述多肽于不高于30％浓度，优选15％-25％浓度的甲醇环境进行脂肪酸甲酯化反应或用于制备生物柴油。

9.制备生物柴油的方法，其包括将权利要求1或2所述的多肽与油脂原料和低级醇进行接触，其中所述低级醇选自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇或其任意组合，优选地，所述低级醇为甲醇或乙醇；优先地，所述接触为将权利要求1或2所述的多肽与油脂原料和低级醇于不高于30％浓度，优选15％-25％浓度的低级醇，优选为甲醇，环境下进行接触。

10.筛选权利要求1或2所述的多肽的方法，其包括：

1)将SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列进行突变，得到突变序列，

2)将步骤1)中获得的突变序列克隆在表达载体上，然后转化或转导至合适的宿主细胞中，

3)培养步骤2)中的宿主细胞，回收重组表达载体，然后将其转化至酵母菌株中培养，和

4)筛选耐甲醇性能高于SEQ ID NO:2所示的多肽的突变多肽。