[发明专利]一种快速鉴别Ale和Lager型啤酒酵母的方法

说明书

本发明公开了一种快速鉴别Ale和Lager型啤酒酵母的方法，属于生物技术检测领域。本发明筛选出SEQ ID NO.2所示的Lager型啤酒酵母的标记基因，并根据该基因设计特异性引物，应用该引物进行PCR扩增，能够扩增出特异性条带的菌株即为Lager型啤酒酵母，反之则为Ale型啤酒酵母。本发明的筛选和鉴定方法简单易行，重复性好，特异性强，准确度高，极大提高了筛选效率。

技术领域

本发明涉及一种快速鉴别Ale和Lager型啤酒酵母的方法，属于生物技术检测领域。

背景技术

啤酒是人类最古老的、消耗量最大的酒精饮料。自1980年以来，我国啤酒生产规模不断扩大，2002年首次超越美国成为世界上最大的生产和消费国。目前啤酒发酵主要有两类形式，即上面发酵和下面发酵。上面发酵生产的啤酒称为Ale啤酒，发酵过程酵母会移动至液面，发酵温度18-23℃，发酵可于两到三天完成。酒体饱满，口感浓郁，颜色深，可以形成很好的果仁味道和水果味道。常见的Ale啤酒有：Brown Ale、Stout、Pale Ale、Porter等。下面发酵生产的啤酒称为Lager啤酒，酵母在发酵时沉在麦汁的下方。发酵温度一般在10-12℃，发酵时间为5-10天。酒体较清澈，口感淡爽，常见的Lager啤酒有：Pilsner、AmericanLager、Bock等。

根据这两种发酵方法，对应的将啤酒酵母分为Ale型和Lager型。传统上区分这两种类型的酵母一般通过啤酒酵母利用棉子糖和蜜二糖的能力、发酵温度以及出芽方式情况等表征方法，该方法耗时长，且存在一定的局限性。因此，亟需一种稳定且快速鉴定啤酒酵母的方法。

发明内容

本发明的目的是为了对啤酒酵母Lager和Ale型进行简便、快捷和准确的鉴定，提供了一种特异性的SCAR分子标记，以及基于特异性分子标记的快速鉴定方法。

本发明的第一个目的是提供一种筛选Lager或Ale型啤酒酵母的方法，所述方法是以SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物对待筛选的啤酒酵母或其基因组DNA进行扩增，能够获得特异性片段的为lager型啤酒酵母，不能获得特异性片段的为Ale型啤酒酵母。

在一种实施方式中，在所述特异性片段的核苷酸序列长度为757bp。

在一种实施方式中，所述特应性片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在一种实施方式中，用于扩增的PCR反应条件为：95℃预变性3min；95℃变性15s，63℃退火15s，72℃延伸15s，共35个循环；72℃延伸5min，降温至4℃保存。

在一种实施方式中，所述PCR反应体系含有2×Rapid Taq Master Mix、SEQ IDNO.3所示的引物、SEQ ID NO.4所示的引物、待测酵母DNA、ddH₂O，上述各组分的体积比为12.5:1:1:1:9.5。

在一种实施方式中，应用琼脂糖凝胶电泳检测扩增后的特应性片段，凝胶图谱显示含有757bp的特异性标记条带的为Lager型啤酒酵母，反之则为Ale型啤酒酵母。

在一种实施方式中，所述方法还对扩增后的特异性片段进行回收和测序。

本发明的第二个目的是提供SEQ ID NO.2所示基因在筛选Lager型啤酒酵母中的应用。

在一种实施方式中，所述Lager型啤酒酵母包括啤酒酵母S23、啤酒酵母CA14、啤酒酵母W-34/70、啤酒酵母BF16、啤酒酵母CA30、啤酒酵母S189、啤酒酵母CA24、啤酒酵母CA25、啤酒酵母CA13、啤酒酵母CA21、啤酒酵母M76、啤酒酵母CA22、啤酒酵母Diamond、啤酒酵母CA36、啤酒酵母CA12或啤酒酵母US-05；所述Ale型啤酒酵母包括啤酒酵母T-58、啤酒酵母WB-06、啤酒酵母M29、啤酒酵母Munich Classic、啤酒酵母WEISS、啤酒酵母BRY-97或啤酒酵母S33。