[发明专利]一种直接提取全血基因组DNA的提取液及其提取方法

权利要求书

1.一种直接提取全血基因组DNA的提取液，其特征在于，包括裂解液、第一漂洗液、第二漂洗液，Proteinase K；

在所述裂解液当中，按1升的浓度计算，包括如下组分：

20mM～25mM Tris；

40mM～50mM EDTA；

0.4M～0.5M NACL；

4.5M～5M GuHCl；

5％～7％Tween-20；

1％～2％Triton X-100；

在所述第一漂洗液当中，按1升的浓度计算，包括如下组分：

15mM～20mM Tris；

10mM～15mM EDTA；

0.4M～0.5M NaAc；

1.5％～2％Tween-20；

65％～70％EOH；

在所述第二漂洗液当中，按1升的浓度计算，包括如下组分：

20mM～50mM Tris；

在所述洗脱液当中，按1升的浓度计算，包括如下组分：

4.5mM～5mM Tris；

0.01mM～0.05mM EDTA；

所述Proteinase K为10mg/ml～20mg/ml的Proteinase K；

其中，所述裂解液、第一漂洗液、第二漂洗液及洗脱液的pH均为8.0。

2.如权利要求1所述的一种直接提取全血基因组DNA的硅胶吸附柱提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

第一步：在试管中加入200μl全血后直接加入400-600μl裂解液、13-16μlProteinase K混匀，在55-65℃的范围下水浴加热15-25min；

第二步：将水浴加热后的样品溶液进行离心吸附，所述离心吸附的速度为7500-8500rpm，离心吸附后倒去废液；

第三步：在吸附有样品的吸附柱中加入400-600μl第一漂洗液后以7500-8500rpm的速度离心进行漂洗，漂洗次数为至少一次后弃去废液；

第四步：在进行了第三步后的吸附柱中加入400-600μl第二漂洗液后以7500-8500rpm的速度离心进行漂洗，漂洗次数为至少一次后弃去废液；

第五步：向吸附柱中央滴加50-100μl洗脱液后以11000-13000rpm速度离心得所述DNA溶液。

3.如权利要求1所述的一种直接提取全血基因组DNA的磁珠吸附提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

第一步：在试管中加入200μl全血后直接加入400-600μl裂解液、13-16μlProteinase K混匀，在55-65℃的范围下水浴加热15-25min；

第二步：在水浴后的样品中加入400-600μl异丙醇后混匀再加入25-35μl gDNA磁珠后二次混匀后室温静置；

第三步：将室温静置后的样品中加入600-800μl第一漂洗液后混匀，将混匀后的样品放置在磁力架上静置后进行至少一次磁力翻转，移去上清液；

第四步：在第三步的样品当中加入700-700μl第二漂洗液后混匀，将混匀后的样品放置在磁力架上静置后进行至少一次磁力翻转，移去上清液；

第五步：将所述第四步得到的下层样品进行干燥后加入90-110μl洗脱液后镇散磁珠后静置分层后，得到的上清液中即含有纯化的基因组DNA溶液。

4.如权利要求3所述的一种直接提取全血基因组DNA的磁珠吸附提取方法，其特征在于，所述第二步的室温静置前翻转混匀至少一次。

5.如权利要求3所述的一种直接提取全血基因组DNA的磁珠吸附提取方法，其特征在于，所述第三步的加入漂洗液前还包括至少一次的磁力翻转混匀。

6.如权利要求3所述的一种直接提取全血基因组DNA的磁珠吸附提取方法，其特征在于，所述第四步进行至少一次。