[发明专利]一种直接提取全血基因组DNA的提取液及其提取方法

说明书

本发明公开了一种直接提取全血基因组DNA的提取液，其特征在于，包括裂解液、第一漂洗液、第二漂洗液，Proteinase K。本发明还公开了使用所述提取液的提取方法。本发明的有益效果在于：本方法主要可以直接从人、哺乳动物及禽类全血中快速提取基因组DNA，本方法样本无需预处理无需先去除红细胞，孵化好的样本缓冲液无需混合胍盐、酒精，可直接过硅胶吸附柱、磁珠吸附等，整个过程无须苯酚和氯仿抽提，无须异丙醇或乙醇沉淀，抽提出的DNA可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学下游相关实验。本发明的方法针对性强，操作方便快速，且通量高，可以使用单个硅胶吸附柱、96孔硅胶吸附柱和磁珠，且硅胶柱回收基因组纯更高可直接用于二代测序。

技术领域

本发明涉样本裂解及基因提取领域，具体涉及一种直接提取全血基因组DNA的提取液及其提取方法。

背景技术

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，在基因组DNA提取过程中应尽量避免使基因组DNA断裂和降解，以保障基因组DNA的完整性，为下面的研究打下基础。

现有技术的提取方法主要有物理法、化学法和生物酶法，而不同的现有方法都具有一些局限性。

玻璃珠法是依赖于高频率的剧烈震荡破坏细胞膜释放核酸，对核酸的完整性损伤极大，不能有效的去除红细胞蛋白，洗脱液中含有血红蛋白，影响纯度和后期实验。

普通高盐法则需先去除红细胞，操作步骤偏多，在多次操作过程中易污染，对后期的实验有很大的影响。

煮沸法在高温条件下基因组DNA极易降解，不能有效的去除红细胞，洗脱液中含有血红蛋白，杂质含量高，对后期的酶切、杂交PCR扩增、测序抑制性较强。

化学单管提取法的得率或纯度比上述三种方法都要理想，但通量低，现有的化学单管提取法只适用于几个或几十个样本的操作，实用性不强。

发明内容

为了克服现有技术存在的上述缺陷，本发明的目的之一在于一种直接提取全血基因组DNA的提取液。

本发明的目的之二在于提供一种直接提取全血基因组DNA的硅胶吸附柱提取方法，该方法在保证了回收基因组DNA提取效率和提取纯度的条件下，操作更加方便简洁且通量更高，更符合现行的高通量测序的前处理的需要。本发明的目的之三在于一种直接提取全血基因组DNA的磁珠吸附提取方法。

为了实现本发明的目的之一，所采用的技术方案是：

一种直接提取全血基因组DNA的提取液，包括裂解液、第一漂洗液、第二漂洗液，Proteinase K；

在所述裂解液当中，按1升的浓度计算，包括如下组分：

20mM～25mM Tris；

40mM～50mM EDTA；

0.4M～0.5M NACL；

4.5M～5M GuHCl；

5％～7％ Tween-20；

1％～2％ Triton X-100；

在所述第一漂洗液当中，按1升的浓度计算，包括如下组分：

15mM～20mM Tris；

10mM～15mM EDTA；

0.4M～0.5M NaAc；

1.5％～2％ Tween-20；

65％～70％ EOH；

在所述第二漂洗液当中，按1升的浓度计算，包括如下组分：

20mM～50mM Tris；