[发明专利]一种利用dITP进行基因随机突变的方法

权利要求书

1.一种利用dIITP进行基因随机突变的方法，其特征在于，包括步骤为：(1)PCR反应中添加一定比例的dITP进行PCR扩增，得到含随机突变碱基的目标基因扩增产物；(2)对步骤(1)得到的扩增产物用限制性核酸内切酶加DNA连接酶法/或DNA重组法等非连接酶依赖性基因克隆技术，将目标基因的随机突变片段克隆到特定载体；(3)将步骤(2)得到的重组载体转化大肠杆菌，经37度培养大肠杆菌，抽提质粒等操作获得目标基因的随机突变文库，即插入了随机突变的目标基因的质粒文库。

2.根据权利要求1所述的利用dITP进行基因随机突变的方法，其特征在于，步骤(1)中所述扩增中采用的是聚合酶链式反应PCR，扩增反应缓冲液中包括有扩增目标基因的正向引物、扩增目标基因的反向引物、目标核酸模板分子、Taq DNA聚合酶、4种脱氧核苷三磷酸，次黄嘌呤核苷三磷酸dITP。

3.根据权利要求1所述的利用dITP进行基因随机突变的方法，其特征在于，步骤(1)中所述次黄嘌呤核苷三磷酸dITP与正常dNTP的相对比例可调。

4.根据权利要求1所述的利用dITP进行基因随机突变的方法，其特征在于，步骤(2)中所述基因克隆方法可以是经典的限制性内切酶与DNA连接酶的常规克隆方法，也可是各种不依赖于DNA连接酶的克隆方法。

5.根据权利要求1所述的利用dITP进行基因随机突变的方法，其特征在于，步骤(3)还包括对含随机突变目标基因的完整重组质粒载体的抽提与挑取单克隆测序鉴定突变程度。