[发明专利]一种适冷性海带淀粉酶及其应用

说明书

本发明涉及生物技术及生化检测技术领域，尤其涉及一种适冷性海带淀粉酶及其应用。海带淀粉酶Lam16A_Wa具有新颖的氨基酸序列及良好的酶学性质，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1。以Lam16A_Wa为基础，本发明建立了一种海带淀粉的定量检测方法：将海带淀粉酶Lam16A_Wa与待测样品进行混合反应，使样品中含有的海带淀粉水解为还原糖，加入对羟基苯甲酰肼(pHBH)与还原糖发生显色反应，将显色吸光值代入标准曲线，即可得知样品中的海带淀粉含量。该检测方法具有快速、准确、特异性强等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术及生化检测技术领域，尤其涉及一种适冷性海带淀粉酶及其应用。

背景技术

海带淀粉是海洋褐藻和硅藻的重要储藏多糖，主要结构为线性的β-1,3-葡聚糖主链及其上β-1,6-键连接的支链，据报道，海带淀粉具有抗病原体、免疫调节、抗氧化等生物活性。而由海带淀粉降解得到的海带淀粉寡糖也被证实有抗细胞凋亡、激活单核细胞、抗肿瘤及诱导植物产生抗病性等活性。

海带淀粉的定量检测是海带淀粉质量控制、功能研究、产品开发中的基础环节。目前，常用的海带淀粉定量检测方法是苯酚-硫酸法和高效液相色谱法等。苯酚-硫酸法灵敏度高，且不需贵重仪器，但准确性和重现性受试验条件影响较大，且耗费时间，样品和试剂消耗较多。高效液相色谱法通过对样品进行水解、衍生及预处理，通过测定海带淀粉组成单糖的含量合计得到海带淀粉含量，该方法灵敏度高、准确性好，但仪器成本高、操作繁琐。

海带淀粉酶能特异性降解海带淀粉中β-1,3-键。在GH16家族海带淀粉酶的研究中，对来自超嗜热菌和嗜温菌的海带淀粉酶的性质、晶体结构、热稳定性及其影响因素有广泛的研究。相比之下，具有适冷性的海带淀粉酶的性质研究较少，而适冷性又是实际应用的良好性状。目前大多数已性质研究的海带淀粉酶具有较高的最适温度(50℃以上)，反应需要消耗热能，且多数酶在高温下不稳定，失活快，实际应用时具有很大的局限性。

对羟基苯甲酰肼(pHBH)是一种芳香族酰肼类化合物，在强碱性条件下能与β-二酮类化合物生成黄色产物。有研究表明，pHBH在高温及碱性条件下，可与葡萄糖等还原糖反应产生相似的黄色物质，反应后颜色深浅与还原糖浓度成正比，且该反应的灵敏度较高。

所以，找到一种具有适冷性的海带淀粉酶，对于海带淀粉的定量检测具有非常重要的意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是大多数已性质研究的海带淀粉酶具有较高的最适温度(50℃以上)，反应需要消耗热能，且多数酶在高温下不稳定，失活快，实际应用时具有很大的局限性。

为解决上述问题，本发明提供一种序列新颖、酶学性质良好、活力高的适冷性海带淀粉酶Lam16A_Wa，并基于该酶提供一种检测样品中海带淀粉含量的方法，该方法具有特异、快速、简便等优点。

为达到上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

一种适冷性海带淀粉酶，为海带淀粉酶Lam16A_Wa，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1。

SEQ ID NO.1：

MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMASMTGGQQMGRGSKDKVAVNDTTEPTVDCPGKITNAVPKGNNNVLVWSDEFNTAGSPCTENWTYDIGNSGWGNNELQYYTRDNAVVENGILKITAKKETYRGAPYTSARMKTQDRFSFTYGKVEVRAKLPYGLGTWPAIWMLGDNISTVGWPTCGEIDIMERAGTSSANLKITTSAIHNSSGYGNTPYVGENEPKEDLSTEFHLYSINWTADKIEFMVDNVVHYTYQPATKDAANWPFDKNQFVILNVAMGGTLGGNVDPDFTESAMEIDYVRVYQ