[发明专利]一种紫菜多糖酶及其应用

权利要求书

1.一种紫菜多糖酶在紫菜多糖定量检测中的应用，其特征在于：为紫菜多糖酶Por16B_Wf，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1。

2.一种紫菜多糖的定量检测方法，其特征在于：采用权利要求1中所述的紫菜多糖酶Por16B_Wf与样品反应，测定400-420nm处的吸光值。

3.如权利要求2所述的紫菜多糖的定量检测方法，其特征在于：检测时采用对羟基苯甲酰肼(pHBH)作为显色剂。

4.如权利要求2所述的紫菜多糖的定量检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)紫菜多糖溶液的配制：称取化学级或以上纯度的紫菜多糖溶于缓冲液，制备具有浓度梯度的紫菜多糖标准溶液；

(2)pHBH溶液的配制：称取pHBH溶于HCl中制备pHBH母液，然后加入NaOH调溶液pH至碱性，制备成10-100mg/mL的pHBH溶液；

(3)定量标准曲线的绘制：取步骤(1)配制的不同浓度紫菜多糖溶液分别与适量的Por16B_Wf酶液混合进行反应，酶的添加量为5-20μL，反应时间为1-30min，反应温度为20-60℃；反应后于100℃金属浴放置5-10min使酶灭活；再加入pHBH溶液，于100℃金属浴中显色5-10min，迅速冷却至室温后离心取上清液，测定上清液的吸光值，检测波长为400-420nm；将相同浓度梯度的紫菜多糖溶液与灭活酶液混合重复上述反应，测定其吸光值作为对照，然后计算出不同浓度紫菜多糖溶液所对应的吸光值增量；以紫菜多糖标准溶液浓度为横坐标，以各浓度紫菜多糖的吸光值增量为纵坐标，通过线性拟合得出特定反应条件下的标准曲线；

(4)样品测定：向样品中加入一定量Por16B_Wf重复步骤(3)的反应；将吸光值增量代入相应加酶量、反应时间、反应温度、反应pH等条件下的标准曲线，计算出反应体系中的紫菜多糖浓度，进而可得到样品中的紫菜多糖含量。

5.如权利要求4所述的紫菜多糖的定量检测方法，其特征在于：步骤(1)中的缓冲液pH为7.0-9.0。

6.如权利要求4所述的紫菜多糖的定量检测方法，其特征在于：步骤(4)测定前根据样品性质对样品进行适当前处理。