[发明专利]一种紫菜多糖酶及其应用

说明书

本发明涉及生物技术及生化检测技术领域，尤其涉及一种紫菜多糖酶及其应用。紫菜多糖酶Por16B_Wf具有新颖的氨基酸序列及良好的酶学性质，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1。以Por16B_Wf为基础，本发明建立了一种紫菜多糖的定量检测方法：将紫菜多糖酶Por16B_Wf与待测样品进行混合反应，使样品中含有的紫菜多糖水解为还原糖，加入对羟基苯甲酰肼(pHBH)与还原糖发生显色反应，将显色吸光值代入标准曲线，即可得知样品中的紫菜多糖的含量。该检测方法具有快速、准确、特异性强等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术及生化检测技术领域，尤其涉及一种紫菜多糖酶及其应用。

背景技术

紫菜具有可食用性且营养价值较高，是目前最具商业价值的海洋藻类之一。紫菜多糖是紫菜中主要的水溶性多糖，存在于细胞壁和细胞间隙中，是一种以(1→4)-6-OSO₃-α-L-吡喃半乳糖与(1→3)-β-D-吡喃半乳糖交替组成的线性结构。有研究表明紫菜多糖具有清除活性氧自由基、抑制癌细胞生长、降低胆固醇等多种生理活性。

紫菜多糖的定量检测是紫菜多糖质量控制、功能研究、产品开发中的基础环节。目前，常用的紫菜多糖定量检测方法是苯酚-硫酸法和液相色谱-串联质谱法等。苯酚-硫酸法灵敏度高，且不需贵重仪器，但其重现性受试验条件影响较大，且耗费时间，样品和试剂消耗较多。液相色谱-串联质谱法通过对样品进行水解、衍生及预处理，通过测定紫菜多糖组成单糖的含量合计得到紫菜多糖含量，该方法灵敏度高、准确性好，但仪器成本高、操作繁琐。

紫菜多糖酶能特异性降解紫菜多糖。但目前对于紫菜多糖酶的研究较少，迄今为止国内外报道了五种紫菜多糖酶，其中包括国内报道的一种，且目前仅有国内的一种酶有生化性质的研究，但该酶的稳定性较差，失活快，实际应用时具有很大的局限性，会导致较大的实验误差。

对羟基苯甲酰肼(pHBH)是一种芳香族酰肼类化合物，在强碱性条件下能与β-二酮类化合物生成黄色产物。有研究表明，pHBH在高温及碱性条件下，可与葡萄糖等还原糖反应产生相似的黄色物质，反应后颜色深浅与还原糖浓度成正比，且该反应的灵敏度较高。

所以，找到一种特异性强、活力高、稳定性好的紫菜多糖酶，对于紫菜多糖的定量检测具有非常重要的意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是已报道的紫菜多糖酶不稳定，失活快，实际应用时具有很大的局限性，限制了采用酶法检测紫菜多糖含量技术的发展。

为解决上述问题，本发明提供一种新型紫菜多糖酶Por16B_Wf，该酶与其他已知酶的序列相似度最高为79％(最相近序列为Zobellia galactanivorans所产的PorB)。该酶的最适反应温度为40℃，最适反应pH值为7.0，且在pH 5.0-10.0的pH值范围内基本保持稳定；该酶具有良好的贮存稳定性，在4℃下可至少稳定贮存3个月，在25℃的温度范围内放置24h后仍能保持90％的初始活力。而且该酶具有良好的反应特异性，对于紫菜多糖具有高活力，但对于其他海洋多糖，如琼胶、褐藻胶、卡拉胶等均无降解作用。综上，紫菜多糖酶Por16B_Wf具有良好的应用潜力，特别是应用于检测紫菜多糖含量，具有操作简便、准确度高、稳定性好的特点。

为达到上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

一种紫菜多糖酶，为紫菜多糖酶Por16B_Wf，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1。

SEQ ID NO.1：