[发明专利]基于哑铃环模板的恒温滚环扩增方法在审
| 申请号： | 201911360205.X | 申请日： | 2019-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN111139289A | 公开（公告）日： | 2020-05-12 |
| 发明（设计）人： | 安然;梁兴国;刘梦琴;周广庆;张伯颖 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 青岛中天汇智知识产权代理有限公司 37241 | 代理人： | 郝团代 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 哑铃 模板 恒温 扩增 方法 | ||
1.基于哑铃环模板的恒温滚环扩增方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)制备哑铃环状DNA作为模板，所述哑铃环状DNA整体对称，两端为大小相等的环部区域，中间为完全互补的茎部区域；
(2)将步骤(1)制备得到的模板加入到反应体系中进行超分支滚环扩增反应，反应得到的扩增产物自身形成二级结构。
2.根据权利要求1所述的基于哑铃环模板的恒温滚环扩增方法，其特征在于，所述哑铃环状DNA的长度为50～200nt。
3.根据权利要求2所述的基于哑铃环模板的恒温滚环扩增方法，其特征在于，所述哑铃环状DNA的长度为80～120nt。
4.根据权利要求1所述的基于哑铃环模板的恒温滚环扩增方法，其特征在于，所述步骤(2)的反应体系包括两条DNA引物、限制性内切酶以及具有链置换作用的DNA聚合酶。
5.根据权利要求4所述的基于哑铃环模板的恒温滚环扩增方法，其特征在于，所述DNA聚合酶为phi 29DNA聚合酶、Bst DNA聚合酶或Vent(exo-)DNA聚合酶。
6.根据权利要求1所述的基于哑铃环模板的恒温滚环扩增方法，其特征在于，所述步骤(1)中哑铃环状DNA的制备方法为环化方式，所述环化方式包括酶法连接、化学合成。
7.根据权利要求1所述的基于哑铃环模板的恒温滚环扩增方法，其特征在于，所述步骤(1)还包括哑铃环状DNA的纯化，所述纯化方式包括采用Exo I纯化、EXO III纯化、切胶回收或HPLC纯化。
8.根据权利要求1所述的基于哑铃环模板的恒温滚环扩增方法，其特征在于，所述模板的浓度为10-3～1nM。
9.根据权利要求1所述的基于哑铃环模板的恒温滚环扩增方法，其特征在于，所述扩增方法的温度范围为聚合酶最适温度范围。
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