[发明专利]检测CYP21A2基因突变的方法、引物和试剂盒在审
| 申请号： | 201911361070.9 | 申请日： | 2019-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN110951862A | 公开（公告）日： | 2020-04-03 |
| 发明（设计）人： | 柏忠良 | 申请（专利权）人： | 福州艾迪康医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12N15/11 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 黄素萍 |
| 地址： | 350008 福建省福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 cyp21a2 基因突变 方法 引物 试剂盒 | ||
1.检测CYP21A2基因突变的引物，其特征在于，包括至少一对用于扩增CYP21A2基因的扩增引物和一对测序引物M13F和M13R，所述扩增引物选自CYP21A2-1_2F/CYP21A2-1_2R、CYP21A2-3_6F/CYP21A2-3_6R、CYP21A2-7_9F/CYP21A2-7_9R、CYP21A2-10F/CYP21A2-10R，其碱基序列为：
CYP21A2-1_2F：TGATGTGGAACCAGAAAGCTGTAAAACGACGGCCAGT
CYP21A2-1_2R：GGGCAGCATAGCAAGAACAACAGCTATGACCATG；
CYP21A2-3_6F：TCCCACCTCAGCCTCAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT
CYP21A2-3_6R：ACCCGCCTCATAGCAATGAACAGCTATGACCATG；
CYP21A2-7_9F：ACAGCCAGTGATGCTACCGTGTAAAACGACGGCCAGT
CYP21A2-7_9R：ACCAGCCTCCACCACATTTAACAGCTATGACCATG；
CYP21A2-10F：ACAGTCATCATTCCGAACCTTGTAAAACGACGGCCAGT
CYP21A2-10R：GAGCACAGTGGACCATCAGAACAGCTATGACCATG；
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；
M13R：AACAGCTATGACCATG。
2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述突变选自IVS2-13A/C>G、R356W、I172N和E3Δ8bp突变。
3.一种检测样品中CYP21A2基因突变的方法，其特征在于，其包括如下步骤：
(1)提取样品DNA；
(2)利用至少一对扩增引物对(1)中的DNA进行扩增，获得扩增产物，其中，所述至少一对扩增引物选自CYP21A2-1_2F/CYP21A2-1_2R，CYP21A2-3_6F/CYP21A2-3_6R，CYP21A2-7_9F/CYP21A2-7_9R，CYP21A2-10F/CYP21A2-10R；
(3)利用测序引物M13F与M13R对(2)中的扩增产物分别进行正向和反向测序，获得所述扩增产物的基因序列；
(4)将(3)中的基因序列与野生型CYP21A2基因序列进行比较，确定CYP21A2基因是否发生突变；
所述扩增引物和测序引物的碱基序列为：
CYP21A2-1_2F：TGATGTGGAACCAGAAAGCTGTAAAACGACGGCCAGT
CYP21A2-1_2R：GGGCAGCATAGCAAGAACAACAGCTATGACCATG；
CYP21A2-3_6F：TCCCACCTCAGCCTCAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT
CYP21A2-3_6R：ACCCGCCTCATAGCAATGAACAGCTATGACCATG；
CYP21A2-7_9F：ACAGCCAGTGATGCTACCGTGTAAAACGACGGCCAGT
CYP21A2-7_9R：ACCAGCCTCCACCACATTTAACAGCTATGACCATG；
CYP21A2-10F：ACAGTCATCATTCCGAACCTTGTAAAACGACGGCCAGT
CYP21A2-10R：GAGCACAGTGGACCATCAGAACAGCTATGACCATG；
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；
M13R：AACAGCTATGACCATG。
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