[发明专利]用于检测肺癌相关基因甲基化的核酸组合物、试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种用于检测肺癌相关基因甲基化的核酸组合物，其特征在于，其包括：引物组合物；

所述引物组合物包括：用于检测RASSF1A基因甲基化的第1引物对、用于检测SHOX2基因甲基化的第2引物对以及用于检测PTGER4基因甲基化的第3引物对；

所述第1引物对包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物；

所述第2引物对包括SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的引物；

所述第3引物对包括SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的引物。

2.根据权利要求1所述的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物还包括探针组合物；所述探针组合物包括：用于检测RASSF1A基因甲基化的第1探针，用于检测SHOX2基因甲基化的第2探针以及用于检测PTGER4基因甲基化的第3探针；

所述第1探针、所述第2探针以及所述第3探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3、6和9所示。

3.根据权利要求2所述的核酸组合物，其特征在于，所述引物组合物还包括检测内参基因的内参引物对，所述探针组合物包括检测所述内参基因的内参探针；

优选地，所述内参基因为ACTB内参基因；

优选地，所述内参引物对包括SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示的引物；

优选地，所述内参探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。

4.根据权利要求3所述的核酸组合物，其特征在于，所述探针组合物中的每种探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；所述探针组合物中，任意两种探针之间所标记的荧光报告基因的类型不同；

优选地，所述荧光报告基团选自FAM、TET、ROX、VIC、JOE、CY3、CY5和HEX中的任意一种，

优选地，所述荧光淬灭基团选自TAMRA、DABCYL、ECLIPSE、BHQ-1、BHQ-2和BHQ-3中的任意一种。

5.根据权利要求4所述的核酸组合物，其特征在于，所述第1探针的5’端标记的荧光报告基团为FAM，3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ-1；

优选地，所述第2探针的5’端标记的荧光报告基团为VIC，3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ-1；

优选地，所述第3探针的5’端标记的荧光报告基团为ROX，3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ-2；

优选地，所述内参探针的荧光报告基团为Cy5，3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ-2。

6.一种检测肺癌相关基因甲基化的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-5任一项所述的核酸组合物。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR缓冲液，所述PCR缓冲液包括如下组分中的一种或几种：

Tris-HCl、K⁺、dNTP、Mg²⁺、甘油、DMSO、BSA、Tween-20、NP-40和TMAC；

优选地，所述PCR缓冲液包括如下组分：Tris-HCl、K⁺、dNTP、Mg²⁺、甘油、DMSO、BSA、Tween-20、NP-40和TMAC；

优选地，所述PCR缓冲液中含有如下组分：28-32mM Tris-HCl、95-105mM KCl、0.4-0.6mM dNTP、5-7mM MgCl₂、3％-5％甘油、1.5％-2.5％DMSO、45-55ng/μL BSA、0.1％-0.3％Tween-20、0.08％-0.12％NP-40和3-5mM TMAC；

优选地，所述PCR缓冲液中含有如下组分：30mM Tris-HCl、100mM KCl、0.5mM dNTP、6mMMgCl₂、4％甘油、2％DMSO、50ng/μL BSA、0.2％Tween-20、0.1％NP-40和4mM TMAC；

优选地，所述PCR缓冲液的pH为7.9-8.1。