[发明专利]用于检测肺癌相关基因甲基化的核酸组合物、试剂盒和检测方法

说明书

本发明公开了一种用于检测肺癌相关基因甲基化的核酸组合物、试剂盒和检测方法，涉及分子生物学领域。其包括引物组合物；该引物组合物包括：用于检测RASSF1A基因甲基化的第1引物对、用于检测SHOX2基因甲基化的第2引物对以及用于检测PTGER4基因甲基化的第3引物对。该核酸组合物可基于荧光定量PCR平台实现对RASSF1A，HOX2和PTGER4基因甲基化的同时检测，且具有高灵敏度和高特异性的特点。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种用于检测肺癌相关基因甲基化的核酸组合物、试剂盒和检测方法。

背景技术

肺癌每年在我国的发病约有78.1万例，死亡约有62.6万例，是目前我国发病率和死亡率均最高的癌症。由于早期肺癌没有明显症状，加上现有早期诊断手段不够敏感，肺癌发现时大多已是晚期，治疗手段有限，5年存活率仅有15.8％。《肺结节诊治中国专家共识(2018年版)》指出，中国肺结节患病率近1个亿，其中5～10％肺结节为肺癌，如果能够在这个阶段发现肺癌，并解决问题，可大幅提高肺癌患者的五年生存率。

目前肺癌筛查与诊断手段包括血清学检查、影像学检查与获取肺癌组织学或细胞学检查技术等，这些手段各有利弊，都分别存在灵敏度或特异性低、费用高、操作难度大、适用范围窄或对患者造成伤害等不同问题。因此，迫切需要一种操作简单，安全创伤性小，灵敏度高，特异性好的肺癌诊断手段。

DNA甲基化检测是一种可以增强肺癌早期诊断准确性的手段。甲基化是DNA表型修饰的一种，抑癌基因启动子CpG岛区域的超甲基化可能会导致转录沉默，从而影响肿瘤发生的进程。由于DNA甲基化在几乎所有癌症中均有发现，并且多发生在癌前或者癌症早期阶段，因而有望成为癌症早期诊断的理想标志物。大量研究显示，通过对特定基因甲基化情况进行检测，可有效提高肺癌的诊断效能，相关的甲基化检测也渐渐从科研走向临床应用。

目前已知有多个抑癌基因在肺癌早期出现异常甲基化，其中RASSF1A、SHOX2与PTGER4甲基化检测在肺癌诊断上具有高灵敏度与高特异性。RASSF1A是Ras信号通路的成员之一，位于3号染色体p21.3区域，调控细胞的增殖和自噬，可能是肺癌、鼻咽癌和胃癌等多种常见肿瘤的相关抑癌基因。RASSF1A基因启动子区CpG岛特异性高甲基化是其失活的主要原因。SHOX2属SHOX基因家族，位于3号染色体q25-q26.1区域，编码转录调控因子，其基因表达调控与器官发育密切相关。SHOX2基因有2个CpG岛，分别位于5’端以及3’端，其甲基化与肺癌有关。PTGER4为G蛋白偶联受体家族的成员，位于5号染色体p13.1，所编码蛋白介导PGE2诱导的早期生长应答蛋白1(EGR1)的表达，并激活糖原合成酶激酶-3(GSK3)的磷酸化。研究显示，RASSF1A与SHOX2基因或SHOX2与PTGER4任意甲基化检出率显著高于良性肺病对照，用于I期肺癌诊断的灵敏度远高于血清学与细胞学手段，具有优越的早期肺癌诊断价值。

但目前缺乏同时检测这三种基因甲基化的相关试剂或试剂盒。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测肺癌相关基因甲基化的核酸组合物，该核酸组合物可基于荧光定量PCR平台实现对RASSF1A，HOX2和PTGER4基因甲基化的同时检测，且具有高灵敏度和高特异性的特点。

本发明的另一目的在于提供一种用于检测肺癌相关基因甲基化的试剂盒，该试剂盒可直接同时对人肺癌特异性的RASSF1A，SHOX2和PTGER4三种基因甲基化分析，用于肺癌的早期诊断，不仅具有较高的灵敏度和特异性，而且具有操作方便、检测结果准确可靠的特点。

本发明的另一目的在于提供一种肺癌相关基因甲基化的检测方法，该方法可以同时对人肺癌特异性的RASSF1A，SHOX2和PTGER4甲基化进行检测，具有较高的灵敏度和特异性，且操作方便、检测结果准确可靠。

本发明是这样实现的：