[发明专利]一种高纯果果二糖单体的制备方法

权利要求书

1.一种高纯果果二糖单体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将菊粉或菊粉来源低聚果糖样品加水溶解，得到样品溶液；

(2)利用菊粉酶对样品溶液进行酶解，加热灭酶，滤膜过滤，得到样品酶解溶液；

(3)样品酶解溶液经一次制备高效液相色谱法分离，利用示差折光检测器或蒸发光散射检测器色谱响应信号，收集糖聚合度为2的馏分，得到二糖洗脱液；

(4)二糖洗脱液经二次制备高效液相色谱法分离，利用示差折光检测器或蒸发光散射检测器色谱响应信号，收集果果二糖馏分，得到果果二糖洗脱液；

(5)将收集的果果二糖洗脱液减压冷冻浓缩、干燥，得到高纯果果二糖单体；

所述步骤(3)中，一次制备高效液相色谱法的色谱条件为：低分离度HILIC色谱柱，流动相为体积比为(70～80)：(30～20)的乙腈和水混合溶液，柱温为20～40℃，流动相速度为3～10mL/min，进样的质量浓度为10％～20％，进样量为100～300μL；

所述步骤(4)中，二次制备高效液相色谱法的色谱条件为：高分离度HILIC色谱柱，流动相为体积比为(70～85)：(30～15)的乙腈和水混合溶液，柱温为20～40℃，流动相速度为3～10mL/min，进样的质量浓度为10％～20％，进样量为100～300μL；

所述低分离度HILIC色谱柱和所述高分离度HILIC色谱柱的规格为10×250mm，20×250mm，30×250mm或以上，粒径为5μm。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，菊粉的聚合度为2～60，菊粉来源低聚果糖的聚合度为2～9。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，菊粉溶液的质量浓度为5％～25％，菊粉来源低聚果糖溶液的质量浓度为10％～50％。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述菊粉溶液的质量浓度为10％～20％，所述菊粉来源低聚果糖溶液的质量浓度为20％～30％。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，菊粉酶的用量为5～100U/g菊粉或5～20U/g菊粉来源低聚果糖，pH值为3～7，酶解温度为40～70℃，酶解时间为2～24h。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述菊粉酶的用量为20～60U/g菊粉或10～15U/g菊粉来源低聚果糖，所述pH值为4～6，所述酶解温度为50～60℃，所述酶解时间为5～10h。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，灭酶温度为80～100℃，灭酶时间为10～30min，滤膜的孔径为0.45μm。