[发明专利]一种高纯果果二糖单体的制备方法

说明书

本发明涉及一种高纯果果二糖单体的制备方法，属于分离提纯技术领域。本发明提供一种高纯果果二糖单体的制备方法，通过酶解法快速提高菊粉或菊粉来源低聚果糖中果果二糖的比例，同时降低同分异构体蔗糖的比例，利用制备高效液相色谱技术分离得到纯度98％以上的符合标准样品要求的果果二糖单体。本发明的制备方法分离时间短，制备量大，可以放大生产，回收率高，得到目前为止纯度最高的果果二糖单体。

技术领域

本发明涉及一种高纯果果二糖单体的制备方法，属于分离提纯技术领域。

背景技术

低聚果糖，分为蔗糖来源低聚果糖和菊粉来源低聚果糖，具体为果糖基经β-糖苷键连接，末端带有α-D-葡萄糖基、聚合度为3～9，或不带有α-D-葡萄糖基、聚合度为2～9的功能性低聚糖。

低聚果糖(Fructooligosaccharides,FOS)天然存在于菊苣、牛蒡、蜂蜜、香蕉等多种植物当中。低聚果糖作为益生元的代表，具有润肠通便、增强免疫力、抗龋齿、促进矿物质的吸收、改善肠道菌群、调节微生态平衡的生理功能。

菊粉来源低聚果糖包括蔗-果型(GF_n)低聚果糖和果-果型(F_n)低聚果糖。果果型低聚果糖(F_n；F为果糖基)的化学结构是2～10个果糖基经β(2→1)糖苷键相互连接而成的果果二糖(F₂)、果果三糖(F₃)、果果四糖(F₄)、果果五糖(F₅)、果果六糖(F₆)、果果七糖(F₇)、果果八糖(F₈)、果果九糖(F₉)等组分，主要来源为菊粉经内切型菊粉酶作用，从菊粉分子内部随机切断糖苷键，得到不同聚合度果果型低聚果糖及少量蔗果型低聚果糖。

低聚果糖在2000年通过美国FDA审核作为公认安全级(GRAS)的功能性低聚糖，由于FOS具有优异的生理学功能，成为近十年来医药、临床营养、保健等领域上广泛流行的功能性基料，应用范围多达500余种保健食品和药品、食品等，市场前景广阔。然而缺乏有效的检测手段，特别是缺少相应的果-果型(F_n)低聚果糖的商业化标准样品，难以精准检测菊粉来源低聚果糖原料及其在食品、保健食品等产品中的含量，一定程度上影响菊粉来源低聚果糖的推广。目前商业化的低聚果糖单体均为蔗-果型(GF_n)低聚果糖(如蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖等)，缺少高纯的果-果型(F_n)低聚果糖单体。因此，果-果型(F_n)低聚果糖单体的研制将有效解决菊粉来源低聚果糖检测的瓶颈问题，对整个低聚果糖行业起到重要的推动作用。

目前，果-果型(F_n)低聚果糖单体的研究或专利不多，主要涉及果果三糖、果果四糖等聚合度为3以上的果-果型(F_n)低聚果糖产品的制备。中国专利CN106543239A采用两次凝胶过滤色谱柱的高效液相色谱法制备纯度大于95％的果果三糖(F₃)、果果四糖(F₄)和40％的果果五糖(F₅)。中国专利CN106632526A采用聚丙烯酰胺凝胶柱分离得到F₃、F₄、F₅、F₆、F₇、F₈或F₉的果-果型(F_n)低聚果糖，纯度也仅大于95％。两专利制备所得果-果型(F_n)低聚果糖还没法作为高纯度对照品甚至标准样品使用。

果果二糖作为果-果型(F_n)低聚果糖之一，目前尚未见到高纯度果果二糖单体制备的报道。果果二糖在菊粉来源低聚果糖中的含量约为0.5％～3％，而在菊粉中含量则更低(通常少于1％)，远低于菊粉来源低聚果糖中果果三糖和果果四糖的含量，若使用上述专利方法富集果果二糖，制备效率太低，且纯度均不高。

发明内容