[发明专利]一种水解植物蛋白制备抗氧化肽的方法

说明书

本发明公开了一种利用蛋白酶水解植物蛋白制备抗氧化肽的方法，主要以大豆分离蛋白粉作原料，以木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶作为催化剂，在10％(w/v)的蛋白浓度、原料质量5％(w/w)的酶浓度、适宜的温度及pH条件下，进行一锅水解反应。本发明使用的蛋白酶组合特异性高，肽产物的稳定性高，反应的可重复性高。水解得到的肽分子量适宜，肽收率高，且具有一定的抗氧化活性。而且，本发明得到的抗氧化肽氨基酸种类丰富，营养成分含量高，在食品及化妆品领域有着重要的应用。

技术领域

本发明生物与医药技术领域，尤其涉及一种利用酶水解植物蛋白制备抗氧化肽的方法。

背景技术

人工合成抗氧化剂价格低、产量高等优点而广泛地应用于食品、护肤品、化妆品工业。但是，随着经济发展，人们对健康越来越重视，致使人们更加青睐安全、纯天然、无毒副作用的天然抗氧化剂，如茶多酚、抗坏血酸及蛋白肽等。食源性抗氧化肽的种类有很多，按照来源分类可分为植物源、动物源、乳源和蛋源等抗氧化肽。植物源主要有玉米、大豆、小麦谷、米糠、油菜籽、花生、豆鹰嘴、大米、米渣、花椒籽、核桃、黑豆、麦胚等。

大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白。大豆分离蛋白中蛋白质含量在90％以上，氨基酸种类有近20种，能为人体提供丰富的营养。但由于大豆蛋白是大分子物质，其溶解度低，并且一些潜在的功能因子隐藏在分子内部，导致大豆分离蛋白功能性质较弱，严重制约其在应用。将大豆的蛋白质进行酶解制备具有抗氧化功能的多肽是常用的提高大豆分离蛋白功能特性的方法。

蛋白酶是一种重要的工业酶，它能选择性的降解蛋白类底物，在食品工业已经有广泛的应用；蛋白酶的来源有动物、植物、微生物。目前，人们已经利用蛋白酶将核桃蛋白、酪蛋白、大豆分离蛋白、黄粉虫蛋白、水产动物蛋白等水解之后制备得到了抗氧化肽。

采用酶水解蛋白制备抗氧化肽是主流的方法，但由于许多蛋白酶有特异性的酶切位点及蛋白质氨基酸序列的独特性，因此选用不同的蛋白及酶组合对于生成具有独特功能性的肽化合物具有重要意义。就现有的酶解方法而言，有些使用了无特异性或广泛特异性的蛋白酶，这样的生产重复性低并且会产生游离氨基酸，或是肽链会被水解的过小导致功能性降低，最后产物的收率也较低，总体而言还缺乏稳定、高效制备抗氧化肽的方法。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种酶解大豆蛋白制备抗氧化肽的方法，该方法收率高、产品稳定、肽具有抗氧化活性，同时还保留了大豆蛋白的营养成分，因此该肽可以被应用到食品、护肤品、化妆品中充当营养成分及功效成分。

本发明的具体技术方案如下：

一种水解大豆分离蛋白制备抗氧化肽的方法，其特征在于,包括如下步骤：

S1：用蒸馏水将豆粕粉配制成料液比为1:10豆粕溶液，搅拌均匀，55℃恒温水浴，调节pH值为8.5，碱提45min，然后浆液在20℃,6000r/min条件下离心20min，收集上清液；

S2：将上清液pH值调至4.5，并酸沉2h收集沉淀物，将沉淀物pH值调至7.0,冷冻干燥得大豆分离蛋白粉；

S3：将大豆分离蛋白粉溶解到去离子水中，搅拌均匀，其中大豆分离蛋白与去离子水的质量体积比为1：10；

S4：同时加入木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，搅拌均匀得到反应液，其中木瓜蛋白酶的重量为大豆分离蛋白重量的5％，菠萝蛋白酶的重量为大豆分离蛋白重量的5％；

S5：调节反应液的pH至7.5，加热反应液至55℃，放入搅拌器中，在40rpm的条件下反应，反应时间为4h，反应结束后温度升高至90～95℃，灭活15min；

S6：过滤或离心去掉不可容物质，即得到所述的抗氧化肽。

进一步地，步骤S4中的离心方法为使用冷冻离心机6000rpm离心10min，过滤方法为使用0.45μm的滤膜进行抽滤。