[发明专利]一种胰激肽原酶的检测方法

说明书

本发明涉及一种胰激肽原酶的检测方法，所述方法如下所示：底物配制：取N‑苯甲酰‑L‑精氨酸乙酯盐酸盐，溶于三羟甲基氨基甲烷缓冲液中，制成底物溶液；标准品溶液配制：取标准品配制成标准品溶液，所述标准品为能够作为标准的胰激肽原酶；供试品溶液配制：取供试品配制成供试品溶液，所述供试品为待检测的胰激肽原酶。本方法可在3‑5分钟内同时进行96次试验，可同时检测多个样本，大幅度提高检验效率，效率提高将近100倍，大大节省时间和成本。且误差率低，一致性好。

技术领域

本发明涉及药物制剂技术领域，具体涉及一种胰激肽原酶的效价评价或检测方法。

背景技术

胰激肽原酶，又称激肽释放酶，英文名称为Pancreatic Kininogenase，Kallidinogenase,Kallikrein，是一种从动物(主要是猪)的胰腺中提取的药用酶，是一种血管扩张药，有改善微循环作用。主要用于微循环障碍性疾病，如糖尿病引起的肾病，周围神经病，视网膜病，眼底病及缺血性脑血管病，也可用于高血压病的辅助治疗。

胰激肽原酶效价检测最新药典方法为：取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐底物溶液2.5ml，与0.1ml供试品(标准品)溶液置比色皿中，25℃±0.5℃下反应，测定253nm波长处1分钟时的吸光度A和3分钟时的吸光度A的差值(△A)，供试品及标准品分别测试3次。通过对比计算标准品△A与供试品△A，得出供试品效价。该方法已经成为检测酶效价约定俗成的方法，长久以来都是作为本领域技术人员的重要甚至是唯一依据。以至于，越来越少的人来研究或突破该方法。

然而，本申请人通过研究发现，该方法存在较多的不足，如该方法采用的是紫外分光光度计法，操作繁琐，耗时较长；且比色皿反应标准品及供试品反应为独立体系，其不是同一体系，误差率高；最重要的是，其检测效率非常低。众所周知，胰激肽原酶效价检测是该酶研究者或生产商等的极其常用的方法，也是几乎唯一的评价标准，因此，该方法的优劣直接影响或决定了对于胰激肽原酶最终结果的评价，也直接影响了该酶的应用以及含有该酶的药物，故该方法其实极其重要，故对于其改进尤为重要。

发明内容

本发明针对现有技术的缺陷提供了一种胰激肽原酶的检测方法，旨在克服现有技术中效率低、一致性差等多个的不足。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现：

本发明的一个发明点为提供一种胰激肽原酶的检测方法，所述方法如下所示：

底物配制：取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐，溶于三羟甲基氨基甲烷缓冲液中，制成底物溶液；

标准品溶液配制：取标准品配制成标准品溶液，所述标准品为能够作为标准的胰激肽原酶；

供试品溶液配制：取供试品配制成供试品溶液，所述供试品为待检测的胰激肽原酶；

检测方法：在含有多孔的酶标板微孔中，先在不同的孔中分别加入标准品溶液和供试品溶液，然后快速在每个微孔中加入N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐底物溶液，反应，测定不同不同时间点的吸光度的差值，通过对比计算标准品与供试品的差值，得出供试品效价。

进一步地，底物配制方法：取15～40mg N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐，溶于pH8.0三羟甲基氨基甲烷缓冲液中，制成浓度为0.1～0.4mg/ml的底物溶液，优选0.2-0.4mg/ml的底物溶液，更有选为0.35mg/ml的底物溶液。

进一步地，所述标准品溶液和供试品溶液的配制方法一样，均为用pH7.0 磷酸盐缓冲液制成2～15IU/ml溶液。

进一步地，所述酶标板为96孔酶标板。

进一步地，所述酶标板放置在酶标仪中。

进一步地，所述检测方法中的加样过程要在冰浴中进行。