[发明专利]基因表达盒及其在Cre-lox重组效率检测中的应用

权利要求书

1.基因表达盒，其包括顺次连接的第一启动子、第一lox位点、报告元件、第二lox位点、目的基因以及第三终止子；

其中，所述第一lox位点和第二lox位点是同向的；

所述报告元件顺次包括第二启动子、第二终止子以及报告基因，且所述第二启动子、所述第二终止子以及所述报告基因是原位反向插入所述基因表达盒中的；

所述报告元件还包括第一终止子，所述第一终止子位于所述第二启动子和所述第二终止子之间，或者位于所述第二终止子和所述报告基因之间。

2.根据权利要求1所述的基因表达盒，所述第一终止子、第二终止子以及第三终止子独立地选自SV40终止子、hGH终止子、BGH终止子和rbGlob终止子。

3.根据权利要求2所述的基因表达盒，所述第一终止子的拷贝数为3或4。

4.根据权利要求1所述的基因表达盒，所述第一启动子和第二启动子均为无细胞特异性的启动子。

5.根据权利要求4所述的基因表达盒，所述无细胞特异性的启动子选自CMV启动子、EFS启动子、miniCMV启动子、EFl-a启动子和PGK启动子。

6.根据权利要求1所述的基因表达盒，所述第一lox位点和第二lox位点独立地选自野生型的loxP位点和突变的lox位点。

7.根据权利要求6所述的基因表达盒，所述突变的lox位点选自lox71、lox75、lox44、lox66、lox76、lox43、lox72、lox78、lox65、lox511、lox512、lox514、lox5171、lox2272、loxM2、loxM3、loxM7以及loxM11。

8.根据权利要求1所述的基因表达盒，所述报告基因的表达产物为通过催化底物反应自身发光或产生颜色变化、或通过催化底物反应使底物发光或产生颜色变化、或经过激发光照射而产生发射光或产生颜色变化的物质。

9.基因表达盒，其为权利要求1～8任一项所述的基因表达盒中的目的基因替换为目的基因插入位点得到。

10.载体，其包含权利要求1～9任一项所述的基因表达盒。

11.细胞，其基因组中含有权利要求1～8任一项所述的基因表达盒。

12.根据权利要求11所述的细胞，其还具有重组酶Cre和/或重组酶Cre表达系统。

13.Cre-lox重组效率检测方法，包括：

a).提供权利要求11所述的细胞，并使所述细胞的基因组与重组酶Cre接触；

b).检测所述细胞内所述报告基因的表达情况，所述报告基因的表达强弱是Cre-lox重组效率高低的指征。