[发明专利]表达PD-1抗体的重组细菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种表达PD-1抗体的重组细菌，其特征在于，由表达PD-1抗体的重组表达载体转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌或大肠杆菌Nissle 1917中得到。

2.根据权利要求1所述的表达PD-1抗体的重组细菌，其特征在于，所述减毒鼠伤寒沙门氏菌为减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009。

3.根据权利要求1或2所述的表达PD-1抗体的重组细菌，其特征在于，所述表达PD-1抗体的重组表达载体包括目的表达片段，所述目的表达片段含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，或所述目的表达片段含有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，或所述目的表达片段含有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。

4.一种表达PD-1抗体的重组细菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

将含有编码PD-1抗体的核苷酸序列的目的表达片段导入表达空载体，得到重组表达载体；及

将所述重组表达载体转化到宿主中，得到表达PD-1抗体的重组细菌，所述宿主为减毒鼠伤寒沙门氏菌或大肠杆菌Nissle 1917。

5.根据权利要求4所述的表达PD-1抗体的重组细菌的构建方法，其特征在于，所述减毒鼠伤寒沙门氏菌为减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009。

6.根据权利要求4所述的表达PD-1抗体的重组细菌的构建方法，其特征在于，所述目的表达片段含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，或所述目的表达片段含有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，或所述目的表达片段含有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。

7.根据权利要求6所述的表达PD-1抗体的重组细菌的构建方法，其特征在于，还包括所述目的表达片段的制备步骤，所述目的表达片段的制备步骤包括：

以pUC57-hPD-1为模板，通过PCR扩增，获得含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的目的表达片段；或

以pUC57-mPD-1为模板，通过PCR扩增，获得含有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列的目的表达片段或含有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列的目的表达片段。

8.根据权利要求7所述的表达PD-1抗体的重组细菌的构建方法，其特征在于，获得含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的目的表达片段的步骤中，PCR的引物如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示；获得含有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列的目的表达片段的步骤中，PCR的引物如SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示；获得含有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列的目的表达片段的步骤中，PCR的引物如SEQ ID No.10和SEQ ID No.11所示。

9.根据权利要求4～6任一项所述的表达PD-1抗体的重组细菌的构建方法，其特征在于，所述表达空载体为Abvec-Igk质粒或pET-28c质粒。

10.根据权利要求4所述的表达PD-1抗体的重组细菌的构建方法，其特征在于，所述目的表达片段含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，或者所述目的表达片段含有如SEQ IDNo.2所示的核苷酸序列，所述表达空载体为Abvec-Igk质粒，所述宿主为减毒鼠伤寒沙门氏菌。

11.权利要求1～3任一项所述的表达PD-1抗体的重组细菌或权利要求4～10任一项所述的表达PD-1抗体的重组细菌的构建方法制得的表达PD-1抗体的重组细菌在制备抗肿瘤药物中的应用。

12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为黑色素瘤、宫颈癌。

13.一种抗肿瘤药物，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的表达PD-1抗体的重组细菌或权利要求4～10任一项所述的表达PD-1抗体的重组细菌的构建方法制得的表达PD-1抗体的重组细菌。