[发明专利]表达PD-1抗体的重组细菌及其构建方法和应用

说明书

本发明涉及一种表达PD‑1抗体的重组细菌及其构建方法和应用。该表达PD‑1抗体的重组细菌由表达PD‑1抗体的重组表达载体转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌或大肠杆菌Nissle 1917中得到。上述表达PD‑1抗体的重组细菌抗肿瘤效果好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种表达PD-1抗体的重组细菌及其构建方法和应用。

背景技术

程序性死亡受体1(PD-1)是一种由288个氨基酸组成的免疫抑制分子，是胞内区、胞外区及疏水性跨膜区构成的I型跨膜糖蛋白。PD-1的胞内区由尾部的两个独立的免疫受体酪氨酸转换基序和抑制基序构成，胞外区由位于顶端的信号序列和免疫球蛋白可变区构成。

PD-1经诱导可表达于多种细胞，如活化得T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、单核细胞以及树突状细胞等。研究表明，肿瘤细胞表达的PD-L1与T细胞表达的PD-1特异性结合后会抑制T细胞的增殖分化能力、降低多种免疫因子的表达以及促进活化的效应细胞T细胞凋亡，从而介导肿瘤细胞的免疫逃逸。在这种情况下，如果能给予PD-1抗体药物，特异性结合PD-1，以阻断肿瘤细胞中PD-L1与T细胞的PD-1结合，则可实现对肿瘤的治疗作用。

尽管上述治疗通路已被证明确切有效，但目前以PD-1抗体为主要活性成份的抗肿瘤药物对肿瘤的治疗效果并不理想。

发明内容

基于此，有必要提供一种抗肿瘤效果好的表达PD-1抗体的重组细菌。

一种表达PD-1抗体的重组细菌，由表达PD-1抗体的重组表达载体转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌或大肠杆菌Nissle 1917中得到。

上述表达PD-1抗体的重组细菌利用减毒鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌Nissle 1917的肿瘤靶向性及肿瘤抑制作用，实现了表达PD-1抗体的重组细菌在肿瘤处直接表达PD-1抗体，使得PD-1抗体具有靶向性，避免了PD-1抗体无法在肿瘤细胞特异性聚集，提高PD-1抗体的有效利用率，从而提高PD-1抗体的抗肿瘤效果。

在其中一个实施例中，所述减毒鼠伤寒沙门氏菌为减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009。

在其中一个实施例中，所述表达PD-1抗体的重组表达载体包括目的表达片段，所述目的表达片段含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，或所述目的表达片段含有如SEQID No.2所示的核苷酸序列，或所述目的表达片段含有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。

一种表达PD-1抗体的重组细菌的构建方法，包括以下步骤：

将含有编码PD-1抗体的核苷酸序列的目的表达片段导入表达空载体，得到重组表达载体；及

将所述重组表达载体转化到宿主中，得到表达PD-1抗体的重组细菌，所述宿主为减毒鼠伤寒沙门氏菌或大肠杆菌Nissle 1917。

在其中一个实施例中，所述减毒鼠伤寒沙门氏菌为减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009。

在其中一个实施例中，所述目的表达片段含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，或所述目的表达片段含有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，或所述目的表达片段含有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。

在其中一个实施例中，还包括所述目的表达片段的制备步骤，所述目的表达片段的制备步骤包括：

以pUC57-hPD-1为模板，通过PCR扩增，获得含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的目的表达片段；或

以pUC57-mPD-1为模板，通过PCR扩增，获得含有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列的目的表达片段或含有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列的目的表达片段。