[发明专利]一种培养基、其制备的角膜基质片和制备方法

权利要求书

1.一种培养基，其特征在于，由基础培养基和以下浓度的组分组成：

角膜提取物5～10μg/ml， Y-27632 10~20μmol/L，ITS 10～20ng/ml，FGF 10～30ng/ml，抗坏血酸1~5mmol/L，胎牛血清0.5vol%~1vol%；

所述基础培养基为DMEM/F12培养基；

所述角膜提取物为猪角膜提取物，由如下方法制备得到：

1）取新鲜猪角膜若干，去除上皮和内皮层；

2）PBS清洗后，用含50%甘油、50%DMEM混合液浸泡，放入－80℃保存使角膜组织失活；

3）解冻后用PBS清洗，晾干，称重；

4）放入研钵中，倒入液氮，进行研磨，直至研成细小粉末状；

5）按5-10ml/g的量加入无菌、4℃ PBS，匀浆；

6）悬液以300rpm摇床，４℃摇匀48h，之后20000-25000g 离心20-30min，以去除未溶的碎屑；

7）吸取上清，用0.22μm过滤头过滤。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，还包括链霉素和青霉素。

3.一种角膜基质片的制备方法，其特征在于，取角膜透镜叠合制成角膜透镜层，将所述角膜透镜层以权利要求1或2所述的培养基培养；所述角膜透镜层由2~9片角膜透镜叠合而成，每两片角膜透镜之间涂覆有含角膜基质细胞的纤维蛋白原溶液和凝血酶、氯化钙的混合液；所述纤维蛋白原溶液中角膜基质细胞的浓度为5×10⁶～1×10⁷个/ml；所述混合液中凝血酶的浓度为10～100U/ml，氯化钙的浓度为40-50mmol/L。