[发明专利]一种斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法

权利要求书

1.一种斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、取干净载玻片用荧光记号笔画直径为1cm的圆圈，在圆圈中加入50μl4％多聚甲醛，将载玻片放入湿盒中；

S2、在显微镜下取斑马鱼心脏放入4％多聚甲醛中固定；

S3、洗涤；

S4、取50μl，5％BSA加入载玻片圆圈中，放入湿盒中封闭；

S5、封闭后重复步骤S3；

S6、加入50μl PBST配置的一抗，将载玻片放进湿盒中，4℃孵育过夜；

S7、次日室温放置湿盒，便于抗体结合；

S8、恢复至室温后重复步骤S3；

S9、加入50μl PBST配置的带有荧光标记物的二抗，室温避光孵育；

S10、在显微镜下重复步骤S3；

S11、加入20μl的荧光猝灭剂，将圆圈中的心脏在荧光显微镜或激光共聚焦下成像，拍照记录结果。

2.如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，步骤S2所述的待测样品固定后在显微镜下吸弃4％多聚甲醛，室温干燥，使其完全贴在载玻片上，便于后续洗涤。

3.如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，步骤S11所述的待测样品中加入的荧光猝灭剂为DAPI，然后于所述待测样品上盖上干净的盖玻片后，用密封剂封住盖玻片四周，待其干燥。

4.如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，步骤S6所述的待测样品孵育过程不超过16小时。

5.如权利要求1至4任一项所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，步骤S3所述洗涤过程包括待测样品干燥后在显微镜下加入50μlPBST，后吸弃。

6.如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，所述一抗为8-OHdG antibody。

7.如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，所述带有荧光标记物的二抗为FITC Goat Anti-mouse IgG。