[发明专利]一种普卡那肽的固相合成方法

说明书

本发明公开了一种适合工业化制备普卡那肽的方法，通过引入特殊保护的氨基酸和/或保护的二肽来固相合成普卡那肽，例如：假脯氨酸二肽、Dmb二肽、Dmb/Hmb/Fmoc‑Hmb/Hnb/Hmsb/Mmsb/Mmtb保护的氨基酸等，解决了常规固相方法合成普卡那肽时，后续氨基酸偶联愈加困难的问题，从而提高了粗肽的纯度与收率；尤其在Ala¹¹位置引入了上述保护氨基酸，纯度与收率兼能提高，粗肽的收率能达到95％，纯度能达到80％以上。

技术领域

本发明涉及多肽制药领域，尤其涉及一种多肽化合物普卡那肽的固相合成方法。

背景技术

慢性特发性便秘(CIC)和肠易激综合征伴便秘(IBS-C)是影响胃肠道的两种最常见的疾病，这些疾病的特点是大便次数减少、紧张、腹痛或不适。我国成人慢性便秘，包括CIC、功能性排便障碍及IBS-C等，患病率4％-6％，就诊0.1亿-0.15亿。慢性便秘可继发精神心理障碍，对患者生活质量损害程度与糖尿病、心衰等慢性疾病相当。

普卡那肽(plecanatide)由美国Synergy制药公司研发，为含有16个氨基酸的环状多肽，能调节胃肠道中的酸碱离子，诱导液体转运进入胃肠道，增加胃肠道的蠕动，适用于治疗成人慢性特发性便秘。美国食品药品管理局(FDA)于2017年1月19日批准上市，商品名为Trulance。其结构式如下：

目前，普卡那肽主链的合成方法主要分为片段法和固相合成法。CN201280021221.6采用片段法，通过片段之间液相缩合形成主链，该方法需要提前制备2个以上的片段，且片段之间液相缩合后处理繁琐，工业化生产步骤多，成本高。对于含有16个氨基酸的短肽，利用固相合成法制备普卡那肽相对于片段法具有操作简单，易于自动化等优点，因此往往采用常规的保护氨基酸进行固相顺序偶联进行合成。但是，经分析普卡那肽的肽链后，本发明人发现，该肽链的空间位阻较大，使用固相常规方法偶联，后续氨基酸偶联愈加困难，从而产品收率低，原料大量浪费，并不适合工业化生产。

发明内容

本发明的目的在于采用特殊保护的氨基酸和/或保护的二肽来固相合成普卡那肽，例如：假脯氨酸二肽、Dmb二肽、Dmb/Hmb/Fmoc-Hmb/Hnb/Hmsb/Mmsb/Mmtb保护的氨基酸等，来解决使用常规固相方法合成普卡那肽时，后续氨基酸偶联愈加困难的问题，从而提高了粗肽的纯度与收率。

本发明提供了一种制备普卡那肽的方法。普卡那肽序列是16个氨基酸单元长度，普卡那肽序列N-末端到C-末端的顺序为H-Asn¹-Asp²-Glu³-Cys⁴-Glu⁵-Leu⁶-Cys⁷-Val⁸-Asn⁹-Val¹⁰-Ala¹¹-Cys¹²-Thr¹³-Gly¹⁴-Cys¹⁵-Leu¹⁶-OH；二硫键(4-12)和(7-15)。

本发明提供了一种制备普卡那肽的方法，包括如下步骤：

(1)将树脂固相载体和Fmoc-Leu-OH偶联，得到Fmoc-Leu-树脂后，脱除Fmoc保护基；得到H-Leu-树脂；