[发明专利]一种同步测定三种晚期糖基化产物的方法

权利要求书

1.一种同步测定三种晚期糖基化产物的方法，其特征在于：包括，

将待测液密封油浴加热后冷却；

加入萃取柱萃取后复溶；

加入内标液，离心得上清液；

将所述上清液过滤后进行检测。

2.如权利要求1所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法，其特征在于：所述萃取柱包括STYRE-H2P(H2P)、STYRE-DBX(DBX)或SupelcleanTM LC-18(LC-18)中的一种或几种。

3.如权利要求1或2所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法，其特征在于：所述萃取柱为STYRE-H2P(H2P)。

4.如权利要求3所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法，其特征在于：所述待测液为将麦芽糊精与赖氨酸按照一定的比例溶磷酸盐缓冲溶液制备所得；所述复溶其溶剂为水；所述内标液包括d4-CML、d4-CEL的一种或几种。

5.如权利要求1、2或4任一所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法，其特征在于：所述油浴其为在120℃的油浴中加热120min；所述冷却为冰浴冷却；所述离心，其为8000～12000rmp条件下离心8～12min。

6.如权利要求1、2或4任一所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法，其特征在于：所述检测为进行HPLC-MS/MS测定。

7.如权利要求6所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法，其特征在于：所述检测的色谱条件如下，

色谱柱为X-Bridge C18(2.1mm×100mm，3.5μm)，柱温为35℃。流动相A相为乙腈，B相为5mM的九氟戊酸水溶液，流速为0.3mL/min。梯度洗脱条件：0min，5％A；5min，60％A；7min，100％A；9min，100％A；10min，5％A；20min，5％A。运行时间为20min，进样体积为5μL。

8.如权利要求6所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法，其特征在于：所述检测的质谱条件如下，

采用MRM下的电喷雾正离子模式，离子源温度为110℃，脱溶剂温度为400℃，毛细管电压为3.5kV,锥孔气体和脱溶剂气的流速分别为50L/h和700L/h。其中MRM模式设置为CML：m/z 205→m/z 84；d4-CML：m/z 209→m/z 88；CEL：m/z 219→m/z 84；d4-CEL：m/z 223→m/z88；Pyr：m/z 255→m/z 175。

9.如权利要求7或8所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法，其特征在于：其中，CML和CEL的测定采用内标法进行定量，Pyr的测定采用外标法进行定量。

10.如权利要求9所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法，其特征在于：CML、CEL和Pyr的回收率均可达99％以上。