[发明专利]一种同步测定三种晚期糖基化产物的方法

说明书

本发明公开了一种同步测定三种晚期糖基化产物的方法，其包括，将待测液密封油浴加热后冷却；加入萃取柱萃取后复溶；加入内标液，离心得上清液；将所述上清液过滤后进行检测，所述萃取柱包括H2P(H2P)、DBX(DBX)或SupelcleanTM LC‑18(LC‑18)中的一种或几种。本发明实现了同时高效准确监测食品中CML、CEL和Pyr的含量，对其在食品加工中的形成机理具有重要意义，CML、CEL和Pyr的回收率均可达99％以上。

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种同步测定三种晚期糖基化产物的方法。

背景技术

晚期糖基化终末产物(Advanced glycation endproducts,AGEs)是蛋白质、多肽或氨基酸的末端自由氨基与还原糖的羰基在美拉德反应中形成的一系列结构复杂化合物的总称。除美拉德反应外，部分AGEs也可由赖氨酸或精氨酸的ε-氨基与糖或油脂氧化生成的二羰基化合物(如乙二醛、丙酮醛和3-脱氧葡萄糖醛酮)直接反应生成。AGEs的概念最早由Brownlee等人于1984年提出，目前已知明确结构的AGEs已有二十多种。医学领域的大量研究表明AGEs在器官、组织和循环系统中的过量聚积会加重机体的氧化应激和炎症反应，诱发或加剧糖尿病，肾衰竭等疾病，具有不可忽视的生理毒性。机体内的AGEs有两个来源：机体内部自己生成的内源性AGEs和通过膳食摄取的食源性AGEs。近年来，越来越多的证据表明食源性AGEs的含量与机体的AGEs水平有着极为密切的关系，且CML、CEL和Pyr是热加工食品中含量较高、研究较为广泛的AGEs，经常作为AGEs标记物来评估食品中AGEs的含量，但目前并无这三种AGEs的高效同步测定方法。因此，高效准确监测食品中CML、CEL和Pyr的含量并探究其在食品加工中的形成机理，对食品安全以及人类的健康有着极为重要的意义。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述的技术缺陷，提出了本发明。

因此，作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种同步测定三种晚期糖基化产物的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种同步测定三种晚期糖基化产物的方法，其包括，将待测液密封油浴加热后冷却；加入萃取柱萃取后复溶；加入内标液，离心得上清液；将所述上清液过滤后进行检测。

作为本发明所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法的优选方案，其中：；所述萃取柱包括H2P(H2P)、DBX(DBX)或SupelcleanTM LC-18(LC-18)中的一种或几种。

作为本发明所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法的优选方案，其中：所述萃取柱为H2P(H2P)。

作为本发明所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法的优选方案，其中：所述待测液为将麦芽糊精与赖氨酸按照一定的比例溶磷酸盐缓冲溶液制备所得；所述复溶其溶剂为水；所述内标液包括d4-CML、d4-CEL的一种或几种；

作为本发明所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法的优选方案，其中：所述油浴其为在120℃的油浴中加热120min；所述冷却为冰浴冷却；所述离心，其为8000～12000rmp条件下离心8～12min。

作为本发明所述的同步测定三种晚期糖基化产物的方法的优选方案，其中：所述检测为进行HPLC-MS/MS测定。