[发明专利]鉴定适用于HBV研究的动物模型的方法和应用

说明书

本发明公开了一种鉴定适用于HBV研究的动物模型的方法和应用，涉及生物技术领域。该方法包括：将获得的待鉴定藏酋猴的MHC‑DPA基因和MHC‑DPB基因的序列分别与SEQ ID NO.1所示的第一参考序列和SEQ ID NO.2所示的第二参考序列比较。该方法可以快速鉴定出适用于HBV研究的藏酋猴模型，有利于提高藏酋猴在HBV研究中的使用效率，避免资源损失。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种鉴定适用于HBV研究的动物模型的方法和应用。

背景技术

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)是噬肝DNA病毒属小包膜DNA 病毒，HBV感染严重威胁人类生命健康，可引起急、慢性肝炎、肝衰竭、肝硬化和肝癌以致死亡。HBV感染是一个全球性的健康问题，世界人口的 1/3有既往或持续感染HBV的血清学证据。全球约有3.5亿HBV慢性携带者，每年约有100万人死于急、慢性HBV感染。我国是HBV感染高发区，约50％-70％的人口感染过HBV，约8-12％的人口为HBV携带者，其传播途径中母婴垂直传播占30％-50％，感染年龄越小，变成慢性携带者的概率越高，90％在新生儿期感染慢性HBV患者会发展为慢性乙型肝炎，慢性感染者面临较大的肝硬化和肝癌的风险，因此，HBV感染在我国是一个严重的公共卫生问题。

乙肝疫苗则可以主动刺激人体特异性免疫反应，清除病毒，但是作用时间长，且起效较慢。尽管乙肝疫苗已广泛使用，在一定程度对乙肝有预防作用，但也存在不应答和不良反应，导致肝炎流行范围广，慢性化程度高，临床缺乏有效地治疗方法。在HBV感染中，病毒清除和疾病发病机制主要由适应性免疫应答介导。从感染HBV到慢性HBV感染的进程受到年龄、环境及宿主基因构成的影响。目前针对乙型肝炎的治疗药物中，诸如干扰素、核苷类似物、多肽类药物、治疗性疫苗及中草药等，虽然有一定的治疗反应外，还没有更为确切的抗病毒治疗方法。而乙肝免疫球蛋白 (HBIG)是高效免疫球蛋白的制剂，通过浓缩和纯化具有乙肝病毒表面抗体阳性的血清制成，可与体内乙肝病毒表面抗原发生中和，达到清除病毒的作用，具有特异性被动免疫的功能。目前乙肝免疫球蛋白在阻断乙型肝炎围产期传播、预防输血后乙型肝炎病毒感染、乙肝病毒阳性病人肝移植后的被动免疫预防、治疗慢性乙肝病毒携带者及预防意外感染事故方面已得到广泛的临床应用。近几年，虽然有不少单克隆抗体、基因工程抗体，包括人源化抗体、小分子抗体的研制开发，但由于基因工程抗体是一种新开发的技术，现在仅用于临床诊断和肿瘤治疗，此种抗体的效果如何，有待实践来证实。随着临床需求逐年增多，目前通过临床人源血分离得到的该制品存在一定的限制。因此开发其他物种来源的与其疗效相同的乙肝免疫球蛋白尤为必要。2012年，李文辉课题组证实NTCP作为功能性受体可以介导HBV及丁型肝炎病毒(hepatitis D virus，HDV)进入肝细胞，为HBV 相关研究开启了一扇崭新的大门。后期研究还发现除NTCP外，可能还存在其他途径介导HBV的侵染。主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)作为脊椎动物中一个与免疫相关的多基因家族，其庞大的等位基因数量及高丰度的多态性，赋予机体巨大潜力以适应内外环境，识别病原微生物入侵。最近对中国、日本和韩国人的全基因组关联分析研究发现了13种单核苷酸突变(SNP)与慢性HBV感染有关，其中11个SNP定位于MHC区域。这11个SNP位点主要位于 HLA-DP/DQ/DOA/C及CFB、NOTCH4等基因中。尽管这些结果证实了 MHC区域与HBV感染之间的关系，但其致病变异和潜在机制仍不清楚。另有研究表明HLA-DPB1基因的相关突变在免疫抑制剂治疗病人的HBV 再激活过程中起到关键作用。

选取合适的动物模型来研究HBV是具有重要意义的。前期研究发现恒河猴在给予乙肝疫苗后，只在注射后几天内表达低浓度的乙肝表面抗体，为一过性，这种模型对HBV研究来说是不合适的。因此，不断发掘适合 HBV研究的动物模型，对开展HBV模型建立、药物筛选及评价提供科学依据具有重要意义，但目前缺乏有效的鉴定适合HBV研究的动物模型的相关方法和配套产品。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容