[发明专利]猪用三联灭活疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了猪用三联灭活疫苗及其制备方法和应用。所述猪用三联灭活疫苗包括：表达O型FMDV VP1基因的重组杆状病毒、猪塞内卡病毒、H3N2亚型猪流感病毒和免疫佐剂。本发明还公开了制备所述猪用三联灭活疫苗的方法，包括：(1)将表达O型FMDV VP1基因的重组杆状病毒扩增后灭活；(2)将灭活的表达O型FMDV VP1基因的重组杆状病毒液和灭活的猪塞内卡病毒液以及H3N2亚型猪流感病毒混合得到水相；(3)将免疫佐剂加热得到油相；(4)将油相加入到水相中混合，乳化。免疫保护效力检测结果证明本发明所制备的猪用三联灭活疫苗能够同时有效防治O型口蹄疫病毒、猪塞内卡病毒和H3N2亚型猪流感病毒。

技术领域

本发明涉及猪用三联灭活疫苗，尤其涉及猪口蹄疫杆状病毒载体、猪塞内卡病毒和H3N2亚型猪流感病毒三联灭活疫苗及其制备方法，属于猪用三联灭活疫苗领域。

背景技术

O型口蹄疫病毒是口蹄疫病毒属、小RNA病毒科的成员之一。在所有七种口蹄疫病毒血清型中，O型在全世界范围内流行和分布最广，非洲北部、东欧、整个南美洲以及亚洲的大部分地区都有报道，严重威胁全球畜牧业旳发展。灭活苗在制备过程中因设备安全性要求高、工艺复杂、花费大、毒株灭活不完全、有散毒的危险等缺点，因此杆状病毒载体疫苗被认为是口蹄疫病毒疫苗研究领域最具潜力的候选疫苗，利用基因重组技术合成并表达具有病毒抗原表位的病毒样颗粒能够诱导动物产生近乎病毒自然感染的免疫力，一直受到高度重视。

塞内卡谷病毒最早由研究者从人胚胎视网膜细胞PER.C6的细胞培养污染物中分离得到，且其被认为源自培养细胞使用的牛血清或者猪源胰蛋白酶。2015年，巴西学者从患有水泡性疾病猪只的水泡液和血清中检测到SVA全基因组的存在，并认为SVV感染与猪的特发性水泡病相关。随后美国、巴西、加拿大、中国、泰国等全球多个国家陆续报道了猪感染SVV的案例。SVV可造成不同年龄阶段的猪群感染，主要临床表现为蹄部和口鼻部发生水泡、溃疡，感染新生仔猪可引起死亡。塞内卡病毒目前尚无商品化的疫苗生产。

流感病毒属于正黏病毒科，1918年首次发现于美国，引起一种急性、发热性、高度接触感染性的呼吸道传染病。猪流行性感冒的高发季节多在深秋、寒冬直至早春，短时内爆发性流行。猪感染S IV后的典型临床症状表现为咳嗽、喷嚏、流涕、高热、食欲减退、精神沉郁、衰竭、呼吸困难、延迟出栏、繁殖障碍等，其特点表现为传染性强、发病率高，死亡率较低，但会严重影响猪的生长性能，延迟出栏时间；同时猪流行性感冒极易与其它呼吸道疾病混合或继发感染，发展成猪呼吸道疾病综合征，使死亡率骤增，给养猪业造成极大危害。

迄今为止，缺乏一种能够同时有效防治O型口蹄疫病毒、猪塞内卡谷病毒和流感病毒的猪用三联灭活疫苗。

发明内容

本发明的目的之一是提供同时有效防治O型口蹄疫病毒、猪塞内卡谷病毒和流感病毒的猪用三联灭活疫苗

本发明的目的之二是提供一种制备所述猪用三联灭活疫苗的方法；

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种猪用三联灭活疫苗，包括：表达O型FMDV VP1基因的重组杆状病毒、猪塞内卡病毒、H3N2亚型猪流感病毒和免疫佐剂。

所述表达O型FMDV VP1基因的重组杆状病毒的构建方法包括：。

(1)将O型FMDV VP1基因克隆至pFastBacⅠ载体得到重组质粒pFB-FMDV-vp1；(2)用重组质粒pFB-FMDV-vp1构建得到重组穿梭杆状质粒rBacmid-FMDV-vp1；(3)将重组穿梭杆状质粒转染昆虫细胞得到表达O型FMDV VP1基因的重组杆状病毒。