[发明专利]一种嗜酸乳杆菌产细菌素及其分离纯化方法

说明书

本发明一方面提供了一种嗜酸乳杆菌产细菌素，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其分子量为1527Da。本发明另一方面提供了该细菌素的分离纯化方法：步骤一，将该细菌素发酵液依次经过经过陶瓷膜、10kDa超滤膜和1kDa超滤膜过滤过滤处理，对截留液进行真空浓缩，得到细菌素粗提物；步骤二，将细菌素粗提物经过Sephadex G‑25分离收集活性馏分；步骤三，将细菌素活性馏分通过HPLC分离纯化细菌素。本发明提供的嗜酸乳杆菌产细菌素对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有较好的抑菌效果，且热稳定性好，具有较广谱的抑菌效果和良好的预防腹泻的作用，可在调节动物肠道菌群平衡的应用中发挥重要作用。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种嗜酸乳杆菌产细菌素及其分离纯化方法。

背景技术

肠道菌群是动物肠道功能的重要组成部分，直接影响肠道内营养物质的吸收利用，脂肪酸的合成与代谢，对动物的消化、免疫以及代谢疾病等方面具有重要影响。肠道菌群紊乱或失调会引起动物腹泻，进而对畜牧业造成巨大的经济损失。此前，抗生素被广发应用于治疗动物腹泻，但是抗生素的大量使用及滥用不仅导致了大量耐药性菌株的出现，也破坏了动物肠道的菌群平衡。

嗜酸乳杆菌是肠道的主要益生菌之一，属革兰氏阳性菌。它可以产生细菌素、有机酸、过氧化氢等多种天然抑菌物质。其中细菌素是其产生的主要抑菌物质，是一种多肽类抗菌物，具有广泛的用途。

细菌素作为天然来源的蛋白类物质，可有效抑制细菌的生长并能够调节动物肠道菌群平衡以此来预防动物腹泻。在食品工业中可以替代部分化学防腐剂，防止食品变质；在饲料工业上可以作为添加剂改善动物的肠道微生物类群；在医药工业上可以调节胃肠道菌群平衡，改善肠道微环境。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种嗜酸乳杆菌产细菌素及其分离纯化方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一方面是提供一种嗜酸乳杆菌产细菌素，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

进一步地，嗜酸乳杆菌产细菌素的分子量为1527Da。

进一步地，嗜酸乳杆菌产细菌素由嗜酸乳杆菌液态发酵生产。

进一步地，该嗜酸乳酸菌为YY13002。

进一步地，液态发酵过程为：将嗜酸乳杆菌接种于试管斜面MRS琼脂培养基上活化菌种，37℃培养24h；然后将活化好的菌种接种于MRS液体培养基，37℃静止培养16～20h制得种子液；将嗜酸乳杆菌种子液按2％接种量接种到MRS培养基中，37℃静止培养36h，得细菌素发酵液。

本发明的第二方面是提供该细菌素的分离纯化方法，包括以下步骤：

步骤一，将该细菌素发酵液经将该细菌素发酵液经依次经过经过陶瓷膜、10kDa超滤膜和1kDa超滤膜过滤处理，将经上述1kDa超滤膜过滤后的截留液进行真空浓缩，得到细菌素粗提物；

步骤二，将步骤一的细菌素粗提物经过Sephadex G-25分离收集活性馏分；

步骤三，将步骤二得到的细菌素活性馏分通过高效液相色谱法(HPLC)分离纯化细菌素。

进一步地，步骤二中的分离步骤为：将细菌素粗提物上样于Sephadex G-25，蒸馏水洗脱，流速1.5-3ml/min，根据洗脱峰收集馏分，洗脱1h-3h，收集第一个洗脱峰的活性馏分。

进一步地，步骤三采用的色谱柱为RP-C8。

进一步地步骤三的流动相包括：A相0.1％TFA水溶液和B相含0.1％TFA的80％乙腈溶液。

进一步地，步骤三的洗脱条件为：流速为3-5ml/min，洗脱时间为30-50min。