[发明专利]一种CRISPR介导的快速检测植物基因功能的系统

权利要求书

1.一种CRISPR介导的快速检测植物基因功能的系统，其特征在于，在Cas蛋白转基因植株中转入含有目的基因gRNA序列的重组病毒载体。

2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述重组病毒载体为烟草脆裂病毒。

3.根据权利要求2所述的系统，其特征在于，所述重组病毒载体为pTRV1和pTRV2。

4.根据权利要求3所述的系统，其特征在于，所述gRNA序列插入于pTRV2载体中。

5.根据权利要求1至4任一所述的系统，其特征在于，所述重组病毒载体转化到农杆菌中，通过农杆菌感染在Cas蛋白转基因植株中转入该重组病毒载体。

6.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述Cas蛋白转基因植株的构建方法为将Cas基因序列插入于植物基因表达载体上，得到Cas基因重组载体，通过农杆菌感染在目标植株中转入该Cas基因重组载体，筛选得到Cas蛋白转基因植株。

7.根据权利要求6所述的系统，其特征在于，所述Cas基因为Cas9基因。

8.根据权利要求7所述的系统，其特征在于，所述Cas9基因为SpCas9基因。

9.根据权利要求5至8任一所述的系统，其特征在于，所述农杆菌感染的具体操作为：

将下胚轴浸置于农杆菌浓度为OD600＝0.4～1.0的MS侵染液中并利用注射器将农杆菌穿刺进入待感染植株的下胚轴皮下0.2～0.25mm深度处，然后静置10～60min；

接着用灭菌滤纸拭去下胚轴上多余的农杆菌，最后将下胚轴移入不含抗生素的愈伤组织诱导培养基内并进行1.5～2.5天共培养；

其中，所述MS侵染液中添加有1％～2％甲基磺酸乙酯和2％～4％乙酰丁香酮。

10.根据权利要求9所述的系统，其特征在于，所述MS侵染液的浓度为OD600＝0.4；

下胚轴被穿刺农杆菌之后静置40min；

所述MS侵染液中添加有1％甲基磺酸乙酯和2％乙酰丁香酮。