[发明专利]一种降钙素原（PCT）的检测试剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种降钙素原（PCT,Procalcitonin）的胶乳增强免疫比浊检测单试剂以及制备方法。该试剂包括PCT抗体致敏胶乳颗粒、乙二胺四乙酸二钠、精氨酸、牛血清白蛋白、聚乙烯磺酸钠、十二烷基聚乙二醇醚以及Proclin300，聚乙烯磺酸钠与十二烷基聚乙二醇醚的比例为5：1。本发明还公开了合适的表面活性剂组合可提高降钙素原检测单试剂的检测灵敏度的制备方法。本发明采用单一试剂，无需混合，灵敏度高，检测速度快，能够直接测量全血、血清和血浆等各种样本，因此可广泛应用于各种透射或者散射分析仪，包括普通生化分析仪、特定蛋白分析仪等。

技术领域

本发明属于医学免疫诊断领域，具体涉及一种降钙素原（PCT）的胶乳增强免疫比浊检测单试剂的制备及其应用。

背景技术

降钙素原（ procalcitonin -简称PCT）是降钙素的前体激素，正常情况下由甲状腺C细胞分泌，经细胞内蛋白水解酶水解后形成的活性成分，其多肽链有114或116个氨基酸组成。严重全身性细菌、真菌和寄生虫感染时，PCT异位生成、水平异常升高，且升高程度与感染严重度及预后相关。PCT在不同医学领域对诊断和指导治疗有很高的价值，与目前所应用的诊断指标相比，PCT在鉴别诊断和控制感染及严重炎症方面提供了额外的信息。近年来发现，在全身细菌感染和脓毒症的辅助和鉴别诊断方面降钙素原是一个具有高特异性和敏感性的新指标。

鉴别诊断细菌性与非细菌性炎性反应

在细菌引起的全身性炎性反应时，血清PCT浓度会出现明显增高，但在病毒感染、自身免疫性疾病、器官移植排斥反应等炎性反应时，血清PCT浓度仅维持低水平，提示血清PCT浓度可以鉴别诊断细菌性或非细菌性炎症。

判断脓毒症和全身炎性反应的严重程度

脓毒症是重症监护室最常见的严重疾病之一，是引起全身炎性反应综合征、多器官功能障碍综合征的常见原因，也是致残、致死率非常高的疾病之一，所以对脓毒症及早确诊，让患者及时得到治疗是重症监护室医生的主要任务。研究发现，脓毒症患者血清PCT值明显高于非脓毒症患者，认为PCT优于目前临床上应用的炎性反应指标，可作为早期鉴别全身感染，尤其是细菌感染的快捷、敏感、准确的检测手段。

PCT的常见检测方法有酶联免疫法（一种降钙素原检测试剂盒；CN201410110849.4）、化学发光法（一种降钙素原的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法；CN201410143487.9）、胶乳增强免疫比浊法（一种定量检测降钙素原PCT的胶乳增强免疫比浊试剂盒：CN201210273085.1）以及荧光层析检测。这些方法中罗氏化学发光检测法为金标准，但设备为全封闭且昂贵，标本测试时间从9-27min不等，报告结果的时间长。

现在市场上已有的PCT胶乳增强免疫比浊试剂采用的是稀释液和胶乳溶液的双试剂形式。在测试时，测试样品必须先在稀释液中稀释，再和胶乳溶液进行混合反应。三甲医院常用仪器平台上，稀释和混合的操作可由稍大型全自动生化分析仪完成，但是在小型半自动平台上尤其是POCT类的便携式平台（三级以下医院以及县乡一级医疗服务单位常用）上进行的测试则需要操作人员手动实施，带来了额外的操作步骤，也引入了更多的操作误差，影响了测试的精密度。

荧光层析检测方法，是将抗体以及部分检测液喷涂于NC膜上，属于干式POCT，其优点是检测速度快，但是不同厂家制作水平差异，其灵敏度在0.5-2ng/mL之间。按罗氏化学发光法归纳的参考标准，0.5ng/mL水平处提示有炎症可能来判断，荧光层析检测在0.5ng/mL处的重复性低可能会导致检测结果出现假阴或假阳情况。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种单一试剂，无需混合试剂，灵敏度高，检测速度快的降钙素原（PCT）的胶乳增强免疫比浊检测试剂。该试剂既可以在大型自动生化分析仪上进行测试，也可以在特定蛋白仪等小型POCT设备上进行测试。