[发明专利]一种多糖的液相色谱质谱联用分析检测方法及其应用

权利要求书

1.一种多糖的液相色谱质谱联用分析检测方法及其应用，其特征在于：使用尺寸排阻色谱—电喷雾—四极杆—Orbitrap质谱(SEC-ESI-Q-Orbitrap)进行分析检测。含有多糖的样品经尺寸排阻色谱分离后，在质谱的离子源内通过源内裂解的方式进行初步碎裂；然后采用MS^ALL的质谱采集方法，所有离子进入碰撞池内进行高能碰撞诱导解离裂解，进而产生一系列特征寡糖离子碎片，通过对特征寡糖离子碎片进行扫描分析进而对多糖待测物进行定量检测。

2.根据权利要求1所述的多糖的液相色谱质谱联用分析检测方法，其特征在于：In-source CID对应的能量为100％，碰撞池内对应的归一化碰撞能量NCE为40％。

3.根据权利要求1所述的多糖的液相色谱质谱联用分析检测方法，其特征在于：采用MS^ALL的质谱采集方法，在四极杆内对多糖的母离子不做选择，所有母离子均进入碰撞池进行高能碰撞诱导解离。

4.权利要求1所述的多糖的液相色谱质谱联用分析检测方法应用于生物样品中葡聚糖等多糖的检测。

5.一种多糖的液相色谱质谱联用分析检测方法及其应用，其特征在于：使用SEC-ESI-Q-Orbitrap进行分析检测。含有多糖的样品经尺寸排阻色谱分离后，在质谱的离子源内通过源内裂解的方式进行初步碎裂；然后采用MS^ALL的质谱采集方法，所有离子进入碰撞池内进行高能碰撞诱导解离裂解，进而产生一系列特征寡糖离子碎片，通过对特征寡糖离子碎片进行扫描分析进而对多糖待测物进行定量检测。其检测条件为：

色谱条件为：

色谱柱为Waters Acquity UPLC Protein BEH SEC色谱柱(4.6×300mm，1.7μm，美国Waters公司)；流动相为等度洗脱，甲醇：水＝(20:80，v/v)；流速为0.3mL/min；柱温为45℃。

质谱条件为：

电喷雾离子源；负离子模式；喷雾电压：3.5kV；源温度：320℃；鞘气(Sheath Gas，N2)：35a.u.；辅助气(Aux Gas，N2)：15a.u.；辅助气温度：350℃；S-lens level：80％；AGC：5e6；最大注入时间：500ms；采集模式：全离子碎裂(All Ion Fragmentation，AIF)；源内裂解能量：100％；归一化碰撞能量(Normalized Collision Energy，NCE：40％；扫描范围：m/z200–3000；分辨率：70,000。

6.根据权利要求5所述的多糖的液相色谱质谱联用分析检测方法，其特征在于：用于定量葡聚糖的特征寡糖碎片为：m/z 545.1718(^0,4A₄)、707.2246(^0,4A₅)、869.2774(^0,4A₆)和1031.3303 (^0,4A₇)。

7.根据权利要求5所述的多糖的液相色谱质谱联用分析检测方法，其特征在于：测定生物样品中葡聚糖，在测定之前包括样品前处理和标准曲线制备步骤，取经由前处理后的上清液进行SEC-ESI-Q-Orbitrap分析，记录色谱图。将葡聚糖特征寡糖离子碎片的峰面积代入标准曲线，求得葡聚糖的浓度。