[发明专利]一种快速检测PRPP的方法及其使用的生物传感器有效
申请号: | 201911387325.9 | 申请日: | 2019-12-27 |
公开(公告)号: | CN112831482B | 公开(公告)日: | 2022-04-15 |
发明(设计)人: | 张大伟;丁冬芹;柏丹阳 | 申请(专利权)人: | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
主分类号: | C12N9/10 | 分类号: | C12N9/10;C07K19/00;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/53;C12Q1/6897;C12R1/19 |
代理公司: | 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 | 代理人: | 苏宇欢 |
地址: | 300308 天津*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 快速 检测 prpp 方法 及其 使用 生物 传感器 | ||
1.响应PRPP的蛋白质突变体,其特征在于,所述响应PRPP的蛋白质突变体为C1)或C2)或C3)或C4)或C 5):
C1)将SEQ ID NO:3所示的蛋白质氨基酸序列中第16位的氨基酸残基进行置换后得到的响应PRPP的蛋白质突变体G16D;
C2)将SEQ ID NO:3所示的蛋白质氨基酸序列中第26位的氨基酸残基进行置换后得到的响应PRPP的蛋白质突变体N26H;
C3)将SEQ ID NO:3所示蛋白质氨基酸序列中第7位、第8位、第10位、第13位、第16位、第17位、第19位、第20位、第25位、第26位、第28位、第29位、第206位、第207位和第208位的氨基酸残基分别置换后得到的响应PRPP的蛋白质突变体分别为G7L,V8A,I10V,D13E,G16Q,Y17W,L19P,D20G,P25L,N26V,Y28C,A29D,C206G,V207A,I208D;
C4)将SEQ ID NO:3所示蛋白质氨基酸序列中第7位与第26位、第7位与第29位、第19位与第26位、第19位与第29位、第17位与第207位、第17位与第142位的氨基酸残基分别进行置换后得到的响应PRPP的蛋白质突变体分别为G7L+N26V,G7L+A29D,L19P+N26V,L19P+N29V,Y17W+V207A,Y17W+T142F;
C5)在C1)或C2)或C3)或C4)所示的响应PRPP的蛋白质突变体的N端或/和C端连接标签得到的融合响应PRPP的蛋白质突变体。
2.编码权利要求1所述响应PRPP的蛋白质突变体的核酸分子。
3.含有权利要求2所述响应PRPP的蛋白质突变体的核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系。
4.权利要求1所述响应PRPP的蛋白质突变体、权利要求2所述响应PRPP的蛋白质突变体的核酸分子或含有权利要求2所述响应PRPP的蛋白质突变体的核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系的应用,为Y1)-Y3)中的至少一种:
Y1)检测PRPP;
Y2)制备用于检测PRPP的生物传感器;
Y3)检测菌株生产PRPP的能力。
5.一种用于检测PRPP的生物传感器,包括表达盒;所述表达盒从上游至下游依次包括启动子、融合基因和终止子;
所述融合基因包括编码权利要求1所述响应PRPP的蛋白质突变体的核酸分子和编码标记蛋白的基因;
所述标记蛋白为荧光蛋白、抗性蛋白或毒素蛋白。
6.如权利要求5所述的生物传感器,其特征在于:所述融合基因中,编码权利要求1所述响应PRPP的蛋白质突变体的核酸分子和编码标记蛋白的基因通过连接肽的编码基因偶联;所述连接肽由5-30个氨基酸组成。
7.如权利要求5或6所述的生物传感器,其特征在于:所述生物传感器为含有所述表达盒的质粒。
8.权利要求5至7任一项所述的生物传感器的应用,为Y1)或Y3):
Y1)检测PRPP;
Y3)检测菌株生产PRPP的能力。
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