[发明专利]一种检测羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒及其制备方法与应用。该检测试剂盒中，酶标板预包被了细粒棘球蚴鸡尾酒抗原；所述细粒棘球蚴鸡尾酒抗原是由细粒棘球蚴鸡尾酒抗原是由EPC1重组抗原、EgAgB1重组抗原、EgAgB2重组抗原和EgAgB4重组抗原组成。使用本发明所提供的检测试剂盒可以快速检测羊血清中的包虫抗体，操作简单，耗时短，敏感性高，特异性好，便于同时检测大量样本。本发明所提供的羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒在包虫病抗体水平检测、流行病学调查中具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于酶联免疫吸附检测领域，涉及一种羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒及其制备方法与应用。

背景技术

包虫病是由棘球绦虫的幼虫寄生于人或动物体内引起的人兽共患病，我国将其列为二类动物疫病，OIE将其列为B类动物疾病。棘球蚴可寄生在宿主体内的任何器官，压迫周围组织造成萎缩和功能障碍，蚴囊破裂还会引起继发性感染或休克，甚至死亡。目前已确认的棘球属绦虫有5种，其中由细粒棘球绦引起的囊型包虫病集中在我国西北畜牧大省，以绵羊、牛、猪感染尤为严重，对公共卫生安全和畜牧业生产造成威胁。

目前诊断包虫病的“金标准”是剖检法，该法对可疑病灶或包囊有时无法鉴定。我国相关的农业行业标准包括间接血球凝集实验、酶联免疫吸附试验和聚合酶链式反应。间接血凝试验是以细胞为载体与抗原抗体特异性结合，准确性高，耗时少，易受环境影响，临床使用性差；聚合酶链式反应特异性好、灵敏度、重复性好，但对实验室硬件条件要求较高，基层兽医实验室难以推广。

酶联免疫吸附法是近年来检测包虫病较为常用的免疫学方法之一。具有快速、简便、费用低廉、可同时检测大量样本等优点，被广泛应用于包虫病的实验室诊断和群体流行病学调查。抗原B(Antigen B,AgB)是细粒棘球蚴囊液的主要抗原成分，占粗抗原的90％，被认为是免疫诊断试验中具有高度敏感性和特异性的抗原。其中EgAgB1、EgAgB2和EgAgB4是血清检测的主要反应亚基。细粒棘球蚴-原头蚴钙结合蛋白1(EPC1)对囊性包虫病具有很强的诊断潜力。故本发明通过利用EPC1重组抗原、EgAgB1重组抗原、EgAgB2重组抗原和EgAgB4重组抗原组成细粒棘球蚴鸡尾酒抗原，建立一种操作简便、快速、特异的羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒，包括细粒棘球蚴鸡尾酒抗原预包被酶标板、阳性对照液、阴性对照液、酶标记物浓缩液、酶标记物稀释液、样本稀释液、底物A液、底物B液、终止液、洗涤液、血清稀释板；所述细粒棘球蚴鸡尾酒抗原是由EPC1重组抗原、EgAgB1重组抗原、EgAgB2重组抗原和EgAgB4重组抗原组成。

上述抗体检测试剂盒中，所述酶标板材质为96孔固相酶标板NUNC-468667。

上述抗体检测试剂盒中，细粒棘球蚴鸡尾酒抗原中表达的EPC1重组抗原、EgAgB1重组抗原、EgAgB2重组抗原和EgAgB4重组抗原的浓度比为2:1:2:1。

本发明还提供了上述羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

1)细粒棘球蚴鸡尾酒抗原的制备：以细粒棘球蚴cDNA文库为模版，针对EPC1、EgAgB1、EgAgB2和EgAgB4基因序列设计特异性引物，通过PCR扩增目的片段并克隆至表达载体pET28a，将成功构建的重组表达质粒pET28a-EPC-1、pET28a-EgAgB1、pET28a-EgAgB2和pET28a-EgAgB4转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，IPTG诱导表达，经亲和层析和分子筛层析高度纯化后得到EPC1重组蛋白、EgAgB1重组蛋白、EgAgB2重组蛋白和EgAgB4重组蛋白。