[发明专利]一种培养免疫细胞的方法

权利要求书

1.一种培养免疫细胞的方法，其特征在于，将来源于腹腔液的单个核细胞培养得到免疫细胞；

所述免疫细胞包括NK细胞和/或CIK细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当所述免疫细胞为NK细胞时，将权利要求1所述的单个核细胞与NK细胞培养液、质量百分含量为8～12％的胎牛血清溶液、饲养细胞混合后，得到混合物，将所述混合物培养14d，得到NK细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述单个核细胞的数量与NK细胞培养液的体积、质量百分含量为8～12％的胎牛血清溶液的体积、饲养细胞的数量比为2.5～3.5×10⁷cells:16～23ml:1.6～2.3ml:1.8～2.2×10⁷cells。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述混合物接种于细胞培养瓶中进行培养，所述单个核细胞的接种密度为0.5～1.5×10⁶cells/ml。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，当使用培养瓶培养时，培养第4d时，更换培养瓶，所述单个核细胞的接种密度为1.2～1.8×10⁶cells/ml，第4d至第6d维持细胞密度为1.2～1.8×10⁶cells/ml。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，第7d时，往培养瓶中添加饲养细胞，饲养细胞的添加量为7.2～8.8×10⁷cells/瓶。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当所述免疫细胞为CIK细胞时，将权利要求1所述的单个核细胞与CIK培养液混合后，将得到的混合物在37℃、5％CO₂下进行培养13d，得到CIK细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述混合物接种于培养瓶中培养，所述培养瓶的规格为175cm²。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，培养24h后，向培养瓶中添加CD3McAb、IL-2和IL-1α，使CD3McAb的终浓度为90～110ng/ml，IL-2的终浓度为900～1100U/ml，IL-1α的终浓度为900～1100U/ml。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，培养第8d时，收集细胞，将细胞转入培养袋中培养，每袋培养袋中含有180～220ml的CIK培养液；

培养第10d时，每袋培养袋中补加380～420ml的CIK培养液；

培养第12d时，每袋培养袋中补加180～220ml的CIK培养液。