[发明专利]一种培养免疫细胞的方法

说明书

本发明提供了一种培养免疫细胞的方法，属于肿瘤治疗技术领域，将来源于腹腔液的单个核细胞培养得到免疫细胞；所述免疫细胞包括NK细胞和/或CIK细胞。采用本发明提供的方法培养得到免疫细胞，不仅利用了病理废弃物腹腔液，而且减少了利用外周血培养免疫细胞给患者造成的二次刺激。

技术领域

本发明属于肿瘤治疗技术领域，尤其涉及一种培养免疫细胞的方法。

背景技术

目前NK和CIK前体细胞主要来源于人外周血分离的单个核细胞，对于肿瘤患者经过放化疗后，外周血淋巴细胞核DNA及细胞免疫功能都会有一定程度的损伤，此时，采取患者外周血是对患者的二次刺激。大多数肿瘤患者后期会产生腹腔液，临床上一般会采取放腹水的方式减轻肿瘤患者的病症。

目前现有腹水的用途主要有以下几个方面：(1)利用临床细胞学检验腹水，鉴别腹水性质，从而诊断癌症。(2)从腹水中分离鉴定exosomes是肿瘤免疫治疗的基础。(3)从肿瘤患者腹腔液中分离癌细胞，为免疫细胞与癌细胞共培养提供试验基础。(4)从卵巢肿瘤患者中分离具有免疫活性的DC(树突状细胞)前体细胞。(5)回收胸腹水中有效成分，制备自体蛋白和TIL(肿瘤浸润淋巴细胞)，其中自体蛋白通过静脉回输为患者提供营养支持，同时可改变腹体渗透压从而抑制腹水的产生，TIL在N-IL-2诱导下，成为LAK(淋巴因子激活的杀伤细胞)细胞，对肿瘤细胞产生杀伤作用。目前未有分离腹水中单个核细胞，进而培养成NK和CIK细胞进行肿瘤免疫细胞治疗的方案。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种培养免疫细胞的方法，采用本发明提供的方法培养得到免疫细胞，不仅利用了病理废弃物腹腔液，而且减少了利用外周血培养免疫细胞给患者造成的二次刺激。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种培养免疫细胞的方法，将来源于腹腔液的单个核细胞培养得到免疫细胞；

所述免疫细胞包括NK细胞和/或CIK细胞。

优选的，当所述免疫细胞为NK细胞时，将上述技术方案所述的单个核细胞与NK细胞培养液、质量百分含量为8～12％的胎牛血清溶液、饲养细胞混合后，得到混合物，将所述混合物培养14d，得到NK细胞。

优选的，所述单个核细胞的数量与NK细胞培养液的体积、质量百分含量为8～12％的胎牛血清溶液的体积、饲养细胞的数量比为2.5～3.5×10⁷cells:16～23ml:1.6～2.3ml:1.8～2.2×10⁷cells。

优选的，所述混合物接种于细胞培养瓶中进行培养，所述单个核细胞的接种密度为0.5～1.5×10⁶cells/ml。

优选的，当使用培养瓶培养时，培养第4d时，更换培养瓶，所述单个核细胞的接种密度为1.2～1.8×10⁶cells/ml，第4d至第6d维持细胞密度为1.2～1.8×10⁶cells/ml。

优选的，第7d时，往培养瓶中添加饲养细胞，饲养细胞的添加量为7.2～8.8×10⁷cells/瓶。

优选的，当所述免疫细胞为CIK细胞时，将权利要求1所述的单个核细胞与CIK培养液混合后，将得到的混合物在37℃、5％CO₂下进行培养13d，得到CIK细胞。

优选的，所述混合物接种于培养瓶中培养，所述培养瓶的规格为175cm²。

优选的，培养24h后，向培养瓶中添加CD3McAb、IL-2和IL-1α，使CD3McAb的终浓度为90～110ng/ml，IL-2的终浓度为900～1100U/ml，IL-1α的终浓度为900～1100U/ml。