[发明专利]一种用于筛选HGFR靶向抗体的ELISA试剂盒及应用

权利要求书

1.一种用于筛选HGFR靶向抗体的ELISA试剂盒，其特征在于所述试剂盒以重组人源HGFR-ECD-Fc为抗原包被酶标板制成。

2.如权利要求1所述的ELISA试剂盒，其特征在于所述试剂盒按如下方法制备：(1)将重组人源HGFR-ECD-Fc以包被缓冲液稀释成0.1μg/mL抗原工作液；在酶标板的每孔加入100μL抗原工作液，37℃孵育1小时后，转入4℃孵育24小时，弃去抗原工作液，每孔加入200μLPBS，洗涤3次后拍干；所述包被缓冲液组成：15mM Na₂CO₃，35mM NaHCO₃，溶剂为水，pH 9.6；(2)用含体积浓度1％牛血清白蛋白的PBS作为封闭液，向步骤(2)拍干的酶标板中每孔加入200μL封闭液，37℃孵育2小时，弃去封闭液，每孔加入200μL PBS，洗涤3次后拍干，即为所述的ELISA试剂盒。

3.如权利要求2所述的ELISA试剂盒，其特征在于所述酶标板为高吸附酶标板。

4.如权利要求2所述的ELISA试剂盒，其特征在于所述重组人源HGFR-ECD-Fc按如下方法制备：将含重组人源HGFR-ECD-Fc基因的表达质粒pCAGGS-HGFR-ECD-Fc-His转染至CHO细胞，一周后收集上清培养基；每升培养基中加入2mL镍琼脂糖凝胶震荡吸附目的蛋白，PBS洗涤镍琼脂糖凝胶3次后，用洗脱液将蛋白溶出，获得重组人源HGFR-ECD-Fc；所述洗脱液组成：50mM Tris，0.5M NaCl，0.01％Tween80，100mM咪唑，溶剂为水，pH 8.0。

5.一种权利要求1所述ELISA试剂盒在检测HGFR靶向抗体中的应用.

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述应用的方法为：

(1)将待测样品稀释于PBS中制成待测样品稀释液，以每孔100μL的量加入所述ELISA试剂盒中，37℃孵育1小时，弃去孔内液体，每孔加入200μL PBS，洗涤3次后拍干；

(2)按体积比1:10000将HRP标记的山羊抗鼠IgG二抗稀释于PBS，以每孔100μL加入步骤(1)中，37℃孵育1小时，弃去孔内液体，每孔加入200μL PBS，洗涤3次后拍干；

(3)以每孔100μL向步骤(2)加入显色底物工作液，37℃孵育10分钟，加入50μL的2MH₂SO₄水溶液终止反应，检测OD450吸光值，若吸光值高于空白对照孔2倍以上，则可确定为阳性；所述显色底物工作液是按体积比1:100将显色底物浓缩液稀释于底物缓冲液中制成；所述显色底物浓缩液为10mg/mL 3,3',5,5'-四甲基联苯胺的二甲基亚砜溶液；所述底物缓冲液组成：25mM柠檬酸，50mM Na₂HPO₄，0.03％H₂O₂，溶剂为水。