[发明专利]一种用于筛选HGFR靶向抗体的ELISA试剂盒及应用

说明书

本发明公开一种用于筛选HGFR靶向抗体的ELISA试剂盒，所述试剂盒以重组人源HGFR‑ECD‑Fc为抗原包被酶标板制成。该ELISA试剂盒将重组人源HGFR胞外域Fc标签融合蛋白(HGFR‑ECD‑Fc)作为抗原固相吸附于酶标板；通过固相化的HGFR‑ECD‑Fc捕获可结合该抗原的抗体；将游离成分洗除后，通过特异识别被捕获抗体的酶标二抗进行定量。本发明ELISA试剂盒可用于检测HGFR靶向的抗体，具有特异性强、灵敏度高等优点，可检测稀释度大于700000倍的抗体，具有良好应用前景。

(一)技术领域

本发明属于检测领域，主要涉及一种用于筛选靶向肝脏增殖因子受体的抗体的酶联免疫试剂盒及其制备方法与应用。

(二)背景技术

肝细胞生长因子受体(Hepatocyte Growth Factor Receptor，HGFR)，是由原癌基因c-met编码的一类位于细胞表面的单次跨膜受体酪氨酸激酶。目前为止已知HGFR的唯一配体是肝脏增殖因子(Hepatocyte Growth Factor，HGF)，HGF通过结合并诱导HGFR二聚化激活该信号通路，进而行使其功能。HGFR信号通路的激活可促进细胞增殖，增强细胞迁移能力，诱导表皮细胞形态发生，以及抑制细胞凋亡，因此该信号通路被认为参与组织的修复与再生。然而，HGFR信号通路的过激活将刺激细胞过度生长，从而诱发癌症的产生；细胞迁移能力的增强将导致癌细胞的转移扩散；而抑制凋亡的活性又与癌症耐药紧密相关。

多项研究结果表明，HGFR的过度激活与多种癌症的发生和发展有紧密关联。一项针对38028位癌症患者的调查研究结果显示，其中221位患者存在HGFR过度激活的情况。体外实验研究结果也显示，HGFR过度激活的癌细胞其增殖速率更快，而且转移性更强。有学者研究发现，HGFR过度激活是恶性胶质瘤的主要诱因之一。表皮生长因子受体抑制剂目前已广泛应用于因其过度激活引起的多种癌症的治疗中，然而随着使用时间的延长，大部分患者都产生了药物抵抗。多项针对表皮生长因子抑制剂抵抗的患者的研究结果表明，HGFR过度激活导致的补偿性细胞增殖信号活化是导致患者对表皮生长因子受体抑制剂产生药物抵抗的主要原因。间接的临床证据表明，抑制HGFR可以起到治疗癌症的效果，比如BMS/Exelixis的Cabozantinib同时抑制VEGFR2和HGFR，在2012年被FDA批准用于治疗甲状腺癌；辉瑞的Crizotinib于2011年获得FDA批准用于治疗非小细胞肺癌，该抑制剂同时抑制ALK和HGFR，相信其抗癌效果也与抑制HGFR有关。另外，很多酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine KinaseInhibitor，TKI)耐药的患者身上也发现HGFR的过度激活，而研究发现联合使用HGFR抑制剂可消除这些药物抵抗效应。这些证据都表明抑制HGFR信号通路的过激活可以起到治疗癌症的效果，因此，HGF和HGFR是抗癌药物开发的候选靶标。

针对HGF和HGFR的选择性抑制剂的研发正在进行中，但主要以竞争性结合ATP位点的抑制酪氨酸激酶活性的小分子化合物为主。然而较多抑制剂由于强烈的细胞毒性而在进入临床试验前止步，例如PHA665752，SU11274等。少数抑制剂目前处于临床试验阶段，例如Capmatinib(INCB28060)，SGX523等，但是目前世界范围内还没有可用于临床治疗的选择性HGFR小分子抑制剂。单克隆抗体的出现引领了第二次生物医药产品浪潮。在抗体药物中，抗肿瘤单抗药物更是异军突起，独占一半市场。单抗药物因其特异性高，靶向性强和毒副作用低的优点，在肿瘤治疗中起着不可估量的重要作用。截止到2017年底，FDA已批准的单抗药物多达77种，例如Roche研发的靶向Her2的Trastuzumab，被广泛用于乳腺癌、胃癌、食管癌的临床治疗。

由于目前市场上也未有用于临床的靶向HGFR的抗肿瘤单抗药物，因此，筛选靶向HGFR的抗体并挑选出可选择性抑制HGF/HGFR信号通路的抗肿瘤单抗极具应用前景，而用于筛选HGFR靶向抗体的ELISA试剂盒将为抗体制备提供简便、高效的检测手段。

(三)发明内容