[发明专利]一个新的甘油单-二酰酯脂肪酶

说明书

本发明提供了一种具有脂肪酶活性的多肽，本发明提供的多肽包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：(a)如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，以及(b)由(a)所述的序列经过取代、缺失或添加至少一个氨基酸后得到的序列，其中由(b)获得的多肽变体仍保持脂肪酶活性。本发明提供的多肽能水解和/或合成甘油单酯和/或甘油二酯。

发明领域

本申请属于酶工程领域，具体地，涉及具有脂肪酶活性的多肽、其编码核酸，以及包含所述编码核酸的表达载体和宿主细胞。

发明背景

脂肪酶是酯酶的一种，可以催甘油三酯、甘油二酯、甘油单酯、其它小分子酯、多元醇酯和多元酸酯酯键的水解，脂肪为脂肪酶的天然底物，水解的过程中会产生甘油二酯和甘油单酯，水解最终产物为甘油和脂肪酸。脂肪酶水解条件温和，副产物少，不需要辅酶。脂肪多为疏水物质，因此水解反应发生在油水界面或者有机相中。甘油单-二酰酯脂肪酶(MDGL)是脂肪酶的一种，MDGL具有底物特异性，仅作用于甘油单酰酯(MAG)和甘油二酰酯(DAG)，对甘油三酰酯(TAG)不起催化作用，可以利用酯化或转酯化反应来生产具有较高工业价值的甘油单酰酯。

Yamaguchi等首先利用卡门柏干酪青霉获得了MDGL，MDGL有2种形态，分子量分别为37KDa和39KDa，MDGL有26个氨基酸组成的信号肽，成熟肽包含279个氨基酸。Yamaguchi等以月桂酸乙烯酯为底物测定卡门柏干酪青霉来源的MDGL酶活单位，经培养基过滤、乙醇纯化、硫酸铵沉淀、DEAE琼脂糖凝胶过滤、纤维素膜纯化和离子交换等纯化步骤后，MDGL的比酶活为6680U/mg。MDGL由mdlA编码，mdlA已经在毕赤酵母中获得表达。

MAG是一种优良的乳化剂，在食品、医药和化妆品工业中有广泛的应用。MAG的传统合成工艺是在高温下，以无机碱为催化剂，在氮气条件下通过油脂/甘油三酯与甘油连续酯化进行生产，产物为MAG、DAG和TAG的混合物，通过蒸馏获得MAG，MAG的产率为40-50％。与传统合成工艺不同，酶法合成MAG是以脂肪酸和甘油为底物，在温和条件下催化合成MAG，酶法催化中脂肪酸的转化率超过97％，MAG在产物中的占比超过74％。目前限制酶法应用的主要问题是酶的活力较低和酶的成本较高。

因此，本领域亟需开发出活力较高的酶。

发明概述

本发明提供了一种具有脂肪酶活性的多肽。

本发明的多肽包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：

(a)如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，以及

(b)由(a)所述的序列经过取代、缺失或添加至少一个氨基酸后得到的序列，

其中由(b)获得的多肽变体仍保持脂肪酶活性。

在本发明的一个具体实施方案中，本发明的多肽包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。优选地，所述多肽由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成。

本发明的脂肪酶活性为甘油单-二酰酯脂肪酶活性。

本发明还提供了编码本发明的多肽的多核苷酸，其包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：

(a)核苷酸序列，其编码如权利要求1(a)或1(b)所述的氨基酸序列；以及

(b)在严格条件下与(a)中的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。

在本发明的一个具体实施方案中，本发明提供的多核苷酸包含SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。在本发明的一个具体实施方案中，所述多核苷酸由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列组成。

本发明还提供了表达载体，其包含至少一种前述的多核苷酸。